A Gas6 c.834+7G>A polimorfizmus szerepe az AMD kialakulásában

Összesen 280 beteget és 106 kontrollt tartalmazott ez a tanulmány. A vizsgált populációk alapvető tulajdonságait a 33. táblázatban mutatom be.

33. táblázat. Az eset-kontroll tanulmányban vizsgált populációk. Rövidítések: BMI (body mass index), MVT (mély vénás thrombosis), AMI (acut myocardialis infarctus). Forrás: doi:10.1371/journal.pone.0050181.t001

A betegeket két alcsoportra osztottuk: 213 beteg a nedves és 67 beteg a száraz AMD alcsoportba került. Nem volt szignifikáns különbség a száraz és nedves alcsoportokban a betegek korát illetően, a kontrollok szignifikánsan idősebbek voltak mint a betegek, de ez a beválasztási kritériumoknak megfelelően szándékosan történt így. Nem volt statisztikailag kimutatható különbség a betegek és kontrollok között a magas vérnyomás, a mélyvénás thrombosis, a myocardialis infarctus, a dohányzás és a BMI tekintetében sem. A kültéri munkavégzés gyakoribb volt a kontrollokban mint a betegekben.

A kontrollokban és a betegekben a vizsgált polimorfizmusok genotípus megoszlását az 34. táblázat tartalmazza.

34. táblázat. A vizsgált polimorfizmusok genotípus megoszlása.

Forrás: doi:10.1371/journal.pone.0050181.t001

A kontroll csoport esetén a vizsgált polimorfizmusokban nem volt eltérés a Hardy-Weinberg egyensúlytól. A minor allélek az ismert AMD génekben gyakoribbak voltak a betegekben. A Mertk receptor polimorfizmusok (kivéve az rs86016) rendkívül alacsony minor allél frekvenciát mutattak és nem volt kimutatható különbség betegek és kontrollok között. Az ApoE esetében E3 allél enyhén magasabb frekvenciával fordult elő a betegekben mint a kontrollokban, míg a potenciális kockázati tényező E2 allél a betegekben alacsonyabb frekvenciával fordul elő a kontrollokhoz képest. Az ApoE E4 allél hasonló frekvenciával fordul elő mindkét csoportban. A nem korrigált esélyhányadosok (EH) a p értékekkel minden genotípus összehasonlításban a 35. táblázatban kerülnek bemutatásra.

35. táblázat. A vizsgált polimorfizmusok által jelentett kockázat. Rövidítés: EH (esélyhányados).

Forrás: doi:10.1371/journal.pone.0050181.t001

A CFH és HTRA1 génekben levő homozigóta polimorfizmusok által jelentett korrigált kockázat igen nagynak adódott. Az esélyhányados az AMD-re nézve a CFH esetében EH=5,3 (95%CI: 2,5-11,5, p <0,0001) és a HTRA1 esetében OR=9,8 (95%CI: 3,3-29,5, p <0,0001). Szignifikáns interakció a változókban nem volt megfigyelhető. A vizsgált faktorok közötti szignifikáns kapcsolatok a 36. táblázatban és a 41. ábrában kerülnek bemutatásra.

36. táblázat. A száraz és nedves AMD-vel kapcsolatot mutató polimorfizmusok (többszörös logisztikus regresszió).

Forrás: doi:10.1371/journal.pone.0050181.t001

Ezek a gének a C3 a CFH és a HTRA1. Interakció mind a C3 és CFH mind a C3 és HTRA1 esetében megfigyelhető volt. A C3 heterozigóta/homozigóta genotípusa szignifikáns kockázatot jelentett vad típussal szemben, de csak akkor, ha a homozigóta CFH vagy HTRA1 polimorfizmus nem volt jelen. Ebben az esetben egy majdnem 5-szörös kockázat volt az esélyhányadosban a száraz típusú AMD esetében (EH: 4,93 (95%CI: 1,98-12,25, p=0,0006). A CFH és HTRA1 mutáció jelenléte a C3 vad típus esetében mind száraz, mind nedves AMD-re jelentős kockázatot jelentett, amely kockázat eltűnt a C3 polimorfizmust nézve hetero illetve homozigóta genotípusok esetében a száraz típusú ben, de megmaradt a szignifikáns kockázat a nedves típusú AMD-ben. Különösen figyelemre méltó összefüggése volt a nedves típusú AMD-vel a Gas6, CHF és HTRA1 géneknek (36. táblázat, 41. ábra).

41. ábra. A Gas6 c.834+7G>A polimorfizmus és a genetikai interakciók hatása az AMD kockázatára.

Forrás: doi:10.1371/journal.pone.0050181.t001

A Gas6 rs8191974 polimorfizmus protektívnek adódott teljesen függetlenül attól, hogy milyenek voltak az egyéb genotípusok (p=0,04), felére csökkentve a nedves típusú AMD kialakulásának kockázatát. Voltak jelei annak, hogy a HTRA1 hatás módosításra kerül a C3 genotípus által, a HTRA1-ben a homozigóta vs. vad típusú vagy heterozigóta genotípus csoport összehasonlítása során, a kalkulált esélyhányadosok EH: 55,04 (95%CI: 5,30-382,83, p=0,0005) a C3 vad típus esetén míg EH: 4,34 (95%CI: 1,09-17,28, p=0,04) a C3 hetero/homozigóta genotípus esetén. A homozigóta CFH polimorfizmus jelentős kockázati tényező a nedves típusú AMD-re, a 6-9-szeres kockázatot jelentve attól függően, hogy a C3-ban van-e mutáció vagy nincs. A C3 genotípus érdemleges hatással a CFH által jelentett kockázatra - ellentétben a HTRA1-el - nincs.

A genotípus szerinti megoszlások alapján megállapítottuk, hogy a Gas6 c.834+7G>A polimorfizmus a Gas6 szintre nincs hatással (42. ábra).

42. ábra. A Gas6 c.834+7G>A polimorfizmus nincs hatással a keringő Gas6 koncentrációjára (nem publikált adat).

A C3 központi szerepet játszik az alternatív útban, és mind experimentális, mind epidemiológiai bizonyíték van arra, hogy részt vesz az AMD pathogenezisében. A C3 p.Arg102Gly polimorfizmusnak szignifikáns hatása a nedves típusú AMD kialakulására nézve a mi kohorszunkban nem volt kimutatható. Egy meta-analízis alapján a homozigóta C3 rs2230199 polimorfizmus enyhe kockázatot jelent a vad típusú egyénekkel szemben (EH: 1,88, 95% CI: 1,59-2,23) (589). A száraz típusú AMD kialakulására kifejtett CFH és C3 polimorfizmusok összefüggő hatása általunk került elsőként közlésre, de a CFH-nak markáns hatása van a neovascularis AMD-re nézve is, függetlenül a C3 státusztól. Mivel ez a két fehérje ugyanazon a biológiai útvonalon fekszik, elképzelhető, hogy az erősebb hatás elmossa a gyengébb hatást. Összességében úgy tűnik, hogy a C3-nak fontos szerepe van a száraz AMD kialakulásában, valamint a CFH és a HTRA1 genotípusok lehetnek hatással a C3 p.Arg102Gly polimorfizmus által kifejtett kockázatra a komplement szabályozó aktivitáson keresztül. A CFI AMD-vel való kapcsolatát is vizsgálták többen, az eredmények nem konklúzívak. Az rs10033900 polimorfizmus összefüggését AMD-vel mi nem tudtuk igazolni. Az ApoE-t illetően az E2 kockázati allél és az E4 protektív szerepét vetik fel (590, 591). A mi eredményeink ezt - hasonlóan a korábbi munkánkhoz - ismételten nem támasztották alá.

Az általunk választott jelölt gén megközelítést a FXIII, Gas6 és az egyik Gas6 receptor MerTK esetében az alábbiak miatt alakítottuk ki:

(1) a véralvadás XIII-as faktora plazma transzglutamináz, amelynek legfontosabb szerepe a fibrin láncok keresztkötése a véralvadás kaszkád folyamatának utolsó lépésében. Ismert az, hogy FXIII a sebgyógyulásban és az embrió implantációjában is szerepet játszik (592). Mivel az angiogenezis

fontos szerepet játszik a neovascularis AMD-ben, úgy gondoltuk, hogy érdemes megvizsgálni a polimorfizmusnak az AMD-vel való kapcsolatát. Nem találtunk semmilyen asszociációt, így látjuk igazolva, hogy a FXIII p.Val34Leu polimorfizmus neutrális mind a száraz, mind a nedves AMD kifejlődésére nézve.

(2) A Gas6 amely a protein S strukturális homológja, kapcsolatba hozható a sejtmigrációval, angiogenezissel, proliferációval. Gyakori polimorfizmusa a c.834+7G>A, csökkent kockázatot is jelenthet cardiovascularis betegségekre nézve. Az egyik receptora a MerTK. Ezek a funkciók mindenképpen a Gas6-et és a receptorait fontos kandidáns génnek jelenthetik AMD esetén. A csoportosított, öszesített korai és késői AMD populációban a Gas6 polimorfizmus nem mutatott statisztikailag kimutatható összefüggést AMD-vel. Amikor a száraz és nedves alcsoportokat külön analizáltuk, a száraz alcsoportban nem sikerült kimutatni összefüggést, viszont egy protektív védő hatást sikerült kimutatni a nedves AMD alcsoportban (p=0,04). Mivel az angiogenezis a nedves típusú AMD-nek tipikus sajátossága, ezért lehetséges az, hogy a Gas6-nek ezen funkciója értelmezhető a betegség kontextusában. A Gas6 képes gátolni a VEGF szignalizációt Axl aktiváción keresztül (577) és a metasztázis-indukált angiogenezis gátlásában is szerepe van (593).

Elképzelhető, hogy a Gas6-nek van egy fontos negatív szabályzó szerepe a patológiás angiogenezisben, így lehet hatása a nedves típusú AMD kialakulására nézve.

Összességében az eset kontroll tanulmányunkban sikerült igazolnunk a korábbi megfigyeléseket az AMD és a különböző CFH, LOC387715 és HTRA1 polimorfizmusok összefüggése tekintetében, míg nem sikerült a CFI és az ApoE esetében. Ennél sokkal fontosabb, hogy sikerült igazolnunk genetikai epistasist a CFH HTRA1 és C3 génekben, bemutatva azt, hogy a C3 polimorfizmus a száraz AMD egy fontos kockázati tényezője, de csak más polimorfizmusoknak a hiányában, viszont a nedves AMD-re nincsen hatása. Ez arra utal, hogy a C3 inkább a száraz, mint a neovascularis AMD pathogenezisében játszik szerepet, és a hatása egyértelműen felülírható más, erősebb kockázati tényezők által. Kimutattunk egy protektív hatást a Gas6 c.834+7G>A polimorfizmus esetében a nedves AMD-t illetően, viszont a polimorfizmus nincs hatással a keringő Gas6 koncentrációjára, azaz valószínűleg nem befolyásolja a Gas6 splicing folyamatát.

Ezek az eredmények megnyithatják az utat más jelölt gén asszociációk vizsgálatára, az AMD pathogenezisét illetően is új információkkal szolgálhatnak.