Gélelektroforézis
Molina Csaba
Gélelektroforézis
Elektroforézises eljárások:
Méret szerinti elválasztására alkalmazott gyakori módszer
A molekulák a töltésüknek megfelelő irányba kezdenek el vándorolni
Felhasználható az izoelektromos pont meghatározására
Tiselius-elektroforézis (vándorló határfelületek módszere)
Zóna-elektroforézis
A mintát keskeny sáv formájában visszük be, az elektroforézis előrehaladtával külön sávra különülnek el
Tiszta folyadékban a sávok elmosódhatnak, ezért célszerű valamilyen hordozó anyagon végezni az
elválasztást.
Gélelektroforézis
Gélelektroforézis:
állófázisai hálózatos szerkezetű gélszerű anyagok, melyek
labirintust képezve a molekulamérettel arányos sebességű áramlást biztosítanak
Alkalmazható gélek:
keményítő agar-agar poliakrilamid cellulóz-acetát
Gélelektroforézis
Fehérjék meghatározása: SDS-PAGE
Izoelektromos fókuszálás: agaróz gélben pH gradiens hozunk létre
Gélelektroforézis
Nukleinsavak elválasztása:
A negatív töltésű nukleinsav molekulák az elektroforézises cella pozitív pólusa felé vándorolnak Az elválasztáshoz szükséges
ellentétes irányú visszatartó erőt a gélmátrix térhálós szerkezete adja.
A vándorlási sebességet befolyásoló tényezők:
fragmens mérete
fragmens konformációja gél koncentrációja
áramerősség
Gélelektroforézis
Fragmentek láthatóvá tétele, kiértékelése:
Etídium-bromid: hozzákötődik a DNS-hez és UV
fényben fluoreszkál
Gyors festés: sample loading dye + fast blast
