(Hernádi et al 2010 [313], Hernádi et al 2011 [314])
A fog gyökércsúcsa körüli fogágyszövetek gyulladása, a periodontitis apicalis jellemzően kevert mikrobiális fertőzés következtében alakul ki, anaerob Gram-negatív endodonto-patogén baktériumok játszanak a vezető szerepet a folyamat kialakulásában. Az anatómiai és szövettani viszonyok miatt a szervezet nem tudja eradikálni a folyamatot. A krónikussá váló lokalizált gyulladás és a szervezet között kialakult patológiás egyensúly felborulása a periodontitis apicalis akut fellángolásához vezet [165]. Az utóbbiban felmerült az Epstein-Barr vírus (EBV, Gamma-herpesvirinae alcsalád) és a humán cytomegalovírus (HCMV, Beta-herpesvirinae alcsalád) patogenetikai szerepe [171-173]. Az említett herpesvírus alcsaládok humán tagjaira jellemző, hogy a primer fertőzés is és a többé-kevésbé rendszeresen bekövetkező vírusürítés is jellemzően a száj és garat nyálkahártyáján keresztül zajlik le.
Kutatási cél
Béta- és gammaherpesvírusok előfordulását, halmozódását és aktivitását vizsgálni a periodontitis apicalis különböző klinikai formáiban
Prospektív, eset-kontroll klinikai vizsgálat. 40 periapikális léziót gyűjtöttünk prospektíven olyan betegektől, akik egy vagy több fogon szájsebészeti apikotómiára szorultak a hagyományos gyökérkezelés sikertelensége miatt. További beválogatási kritérium volt a beteg kielégítő általános állapota és súlyosabb szisztémás betegségek hiánya az Amerikai Aneszteziológiai Társaság által kiadott szempontok szerint, valamint a vizsgált fog marginalis periodontiumában nem lehetett gyulladás (szondázási mélység ≤4 mm). A kontroll csoport 40 impaktált bölcsességfog gyulladás- és szuvasodásmentes pulpája volt. Az érintett bölcsességfogakat pericoronitis vagy szekunder fogtorlódás miatt kellett eltávolítani.
A periapikális léziókat a radiológiai méret alapján ≥5mm és <5mm csoportokba osztályoztuk, a fogakat pedig panaszmentes és panaszos csoportokba. Akkor soroltuk az utóbbiba a fogat, ha az akutan fájt, ráharapásra vagy kopogtatásra fájdalmat jelzett vagy a gyökércsúcs felőli nyálkahártya nyomásérzékeny volt. A feldolgozásig <‒70°C hőmérsékleten fagyasztott mintákból DNS-t és RNS-t izoláltunk, a vírus genomi DNS-ét PCR amplifikálással, az EBNA fehérjék közös leader szakaszáról átíródott virális mRNS-t reverz transzkripciót követő PCR amplifikálással mutattuk ki. A vizsgált vírusok halmozódását, génexpressziós aktivitását egyrészt a kontroll csoporthoz viszonyítottuk, másrészt a fentebb részletezett esetcsoportok között hasonlítottuk össze.
Eredmények
Az összes periapikális lézió 72%-ban mutattuk ki az Epstein-Barr vírus (EBV) jelenlétét, míg a kontroll mintákban csak elenyésző arányban fordult elő. Az esetek jelentős részében, az összes minta felében génátírást is ki lehetett mutatni a járulékos EBNA antigéneket kódoló genomi régióról. A kontroll mintákhoz viszonyítva mindkét mind genomi DNS, mind transzkripciós szinten szignifikánsnak bizonyult az EBV halmozódása a periapikális léziókban. (17. táblázat ).
17. táblázat Epstein-Barr vírus (EBV) genomi DNS és EBNA mRNS előfordulása a periapikális léziókban
EBV DNS EBNA mRNS
periapikális lézió
(n=40) 29 (72%)* 20 (50%)*
panaszos
(n=17) 14 (82%)* 12 (71%)*
panaszmentes
(n=23) 15 (65%)* 8 (35%)#
lézióméret ≥5mm
(n=21) 19 (91%)* 16 (76%)*
lézióméret <5mm
(n=29) 10 (53%)* 4 (21%)+
kontroll minták
(n=40) 1 (2,5%) 1 (2,5%)
*p<0,0001, #p<0,001, +p<0,05 a kontrollokhoz viszonyítva
A periapikális léziókat tovább csoportosítottuk panaszosság ill. radiológiai lézióméret szerint és minden alcsoportban mindkét EBV marker szignifikánsan gyakrabban fordult elő, mint a kontrolloknál. Az előfordulási arányok mindazonáltal magasabbak voltak, ha a lézió panaszt okozott a betegnek, vagy ha nagyméretű volt.
Maga a lézióméret is hatással van a panaszosságra és adataink is arra utaltak, hogy a nagy lézióméret és a panaszos megnyilvánulás tendenciaszerűen együtt fordul elő (18. táblázat (19. táblázat)), ezért az EBV markerek és lézióméret együttes kockázatát vizsgáltuk logisztikus regressziós analízissel. Az egyváltozós analízis alapján az EBNA mRNS és a nagy lézióméret tűnt a panaszosság kockázati tényezőjének. Ezért a többváltozós analízisben az EBNA mRNS-t a lézióméretre, a lézióméretet pedig az EBNA mRNS-re standardizáltuk.
18. táblázat. Periapikális léziók panaszos megnyilvánulásának kockázati tényezői
Standardizálás *EBNA mRNS-ra ill. **lézióméretre., n.a. nem alkalmazható, #95 % konfidencia intervallum a hozzátartozó p értékkel, ##p for trend érték.
Az egymásra standardizálás mind a lézióméret, mind az EBNA mRNS esélyhányados értékét csökkentette és a tisztított esélyhányadossal (OR) jellemzett kockázat szignifikanciáját is erodálta (18.
táblázat). Ez alapján feltételeztük, hogy a két tényező együttes jelenléte határozza meg a panaszosság kockázatát. Az eseteket három csoportra bontottuk, az első csoportban egyik rizikótényező sem volt
jelen, az elemzésben ez volt a referencia csoport, a második csoportban a két rizikótényezőből csak az egyik volt jelen, míg a harmadik csoportot mindkét rizikótényező megléte jellemezte. Az eredmények alapján az EBNA transzkripció és a nagy lézióméret együttes előfordulása jelentett szignifikáns 8,8×
kockázatot a panaszos manifesztációra (18. táblázat).
19. táblázat Bétaherpesvírus DNS előfordulása periapikális léziókban
HCMV HHV-6A HHV-6B
periapikális lézió
(n=40) 4 4 4
lézióméret <5mm
panaszmentesb(n=15) 1 2 0
panaszos (n=4) 0 1 0
lézióméret ≥5mm
panaszmentes (n=8) 2 1 0
panaszos (n=13) 1 0 4*
kontroll minták
(n=40) 0 1 0
*p<0,05 a kontroll mintákhoz viszonyítva
A bétaherpesvírusok előfordulási aránya az EBV-nél lényegesen alacsonyabb volt (19. táblázat) és virális mRNS expresszió sem volt kimutatható. A HCMV, a HHV-6A és a HHV-6B előfordulása azonos (10%-os) arányúnak bizonyult. Közülük a HHV-6B szignifikáns összefüggést mutatott a klinikai típussal, mind a négy 6B fertőzés nagyméretű panaszos lézióban fordult elő. A HHV-6A és a HCMV előfordulása megoszlott a klinikai típusok között és panaszmentes periapikális léziókban is előfordultak.
A HCMV és a HHV-6 vírusok elsősorban olyan mintákban lehetett kimutatni, amelyben az EBV is jelen volt. Kilenc mintában volt koinfekció, egy hármas EBV-HCMV-HHV-6 koinfekciót észleltünk, hat esetben HHV-6, két esetben HCMV fordult elő az EBV mellett. Minden koinfekcióban aktív EBNA expresszió volt megfigyelhető. EBV monoinfekció 20 mintát érintett, HCMV ill. HHV-6A monoinfekció egy-egy mintában fordult elő. A mono- és a koinfekciós minták között nem volt szignifikáns különbség a panaszos klinikai manifesztációban (41% vs. 56%, p=0,73). A vizsgálatot később kiterjesztettük a másik humán gammaherpesvírusra, a HHV-8-ra is, de HHV-8 DNS-t nem lehetett egyik periapikális lézióban sem kimutatni (20. táblázat) [315]
Megbeszélés
A periodontitis apicalis és az EBV kapcsolatát korábban részben EBNA mRNS detektálásán keresztül [172, 173, 178, 179], részben pedig az LMP fehérjék immunhisztokémiai kimutatásával igazolták [316]. Mind az EBNA mRNS, mind az LMP fehérjék jelenléte az EBV III. típusú látencia fázisára utal, amelyben ugyan vírusreplikáció nem folyik, de a B-limfocita gazdasejtben fokozódik a proliferáció és egyes citokinek, (pl. TNF-alfa, TGF-béta) termelődése [154]. Saját tanulmányunk is kimutatta az EBV fertőzés e stádiumának nagyarányú előfordulását a vizsgált periapikális léziókban.
Ugyanakkor a periapikális léziókban előforduló EBV fertőzések mintegy harmadában nem volt detektálható az EBNA mRNS. A korábbi tanulmányokhoz [172, 173, 178, 179] képest az eredményeink abban jelentettek előrelépést, hogy kimutattuk a nagy lézióméret és a virális transzkripció együttes kockázati szerepét a panaszos megnyilvánulásban.
Humán herpesvírus (HHV)-6 orális jelenléte az EBV-hez hasonlóan jól ismert és az ínyszél felől kialakuló parodontitis chronicában többen is kimutatták [170, 175, 176]. Azonban periodontitis apicalisban munkacsoportunk írta le a két HHV-6 species jelenlétét. A HHV-6A főként panaszmentes és kisméretű léziókban fordult elő, míg a HHV-6B szignifikánsan halmozódott a nagyméretű panaszos periapikális léziókban. Ugyan a HHV-6 tendenciaszerűen az EBV-vel koinfekcióban fordult elő, mégis valószínű, hogy a HHV-6 vírusok halmozódása klinikai manifesztáció mentén az EBV hatástól függetlenül jelentkezett, mivel minden EBV/bétaherpesvírus koinfekcióban ott volt az EBNA expresszió, de a nagyméretű panaszos lézióval csak a HHV-6B fertőzés asszociált, a többi bétaherpesvírus nem. A HHV-6 fertőzések immunmoduláló hatása is ismert, a fertőzés fokozza a TNF-alfa, IL-1béta, IL-8 és IL-15 lokális termelődését [127, 129]. Az EBV és a HHV-6 fertőzések citokin hatásában közös mechanizmus a fokozott TNF-alfa termelődés, amelynek viszont jól ismert a lokális csontfelszívódást és hiperalgéziát, panaszos manifesztációt okozó hatása [156].
Következtetések
Az endodonto-patogén baktériumok által kiváltott periodontitis apicalis chronica kórfolyamatban magas gyakorisággal előfordul az EBV vírus. Az EBV fertőzések mintegy kétharmadában megfigyelhető a transzformáló EBNA gének transzkripciós aktivitása, amely a lézió radiológiai méretével együtt a panaszos manifesztáció kockázati tényezője.
Kutatócsoportom írta le a HHV-6 vírusok előfordulását a periapikális léziókban, valamint a HHV-6B vírus halmozódását a nagyméretű, panaszos manifesztációjú periapikális léziókban.