• Nem Talált Eredményt

DNS amplifikáció

N/A
N/A
Info
Letöltés
Protected

Academic year: 2022

Ossza meg "DNS amplifikáció"

Copied!
5
0
0

Betöltés.... (Teljes szöveg megtekintése most)

Letöltés most ( 5 Pldal )

Teljes szövegt

(1)

DNS amplifikáció

(

egy DNS szakasz sokszorosítása - amplification)

pl . DNS szekvenálásnál nagy jelentősége van

- sejten belül (in vivo) pl. E. coliban

(2)

Sejten kívüli DNS sokszorosítás

• használták az E.coli DNS polimerázát is

• az áttörést azonban a hőstabil DNS polimeráz (Taq)

hozta, ami a Thermus aquaticus -ból származik

(3)

PCR (polimeráz láncreakció)

• A PCR egy automatizált DNS sokszorosító, amit az amerikai kutató Kary Mullis fejlesztett

ki a 80-as években

• Ennek kifejlesztését a Taq polimeráz tette

lehetővé, mivel megnövelte a PCR

(4)

A PCR-hez szükségesek

• hőstabil DNS polimeráz (Taq)

• templát DNS a cél szekvenciával

• dATP, dCTP, dGTP,dTTP

• reverse és forward oligonukleotid primerek

• Mg

2+

ion a polimeráz enzim aktivitásához

• pH stabilizáló puffer (Tris-Cl) és KCl

(5)

A PCR ciklikusan működik

Elődenaturáció 2 perc 95 °C

• A denaturáció során a dupla DNS szál ketté válik ez 95°C-on 30-60 s-ig tart

2. A primerek kötődnek a DNS szálakhoz 3’ irányba, ez kb. 55- 60°C-on 30-60 s-ig tart

3. A szintézis során a polimeráz enzim 3’-5’ irányba kb. 2000 nukleotid/perc sebességgel dolgozik, 60-120 s 72-78°C-on

Ezt a ciklust pl. 30-szor megismétli az automatizált termosztát és

Hivatkozások

Letöltés most ( PPT - 5 Pldal - 35.00 KB )

KAPCSOLÓDÓ DOKUMENTUMOK

7. Polimeráz láncreakció (PCR)

Két, vagy több DNS mintát össze lehet hasonlítani abból a szempontból, hogy ugyanahhoz a személyhez, vagy különböz ő személyekhez tartoznak.. A PCR kis DNS

1.1. Polimeráz láncreakció (PCR)

A primerek olyan rövid, egyes szálú DNS darabkák, ame- lyekkel „megcímkézzük” a sokszorosítandó génszakasz két végét.. A DNS polimeráz innen „folytatja” az új

1.1. Polimeráz láncreakció (PCR)

A primerek olyan rövid, egyes szálú DNS darabkák, ame- lyekkel „megcímkézzük” a sokszorosítandó génszakasz két végét.. A DNS polimeráz innen „folytatja” az új

(PCR) 1.1. POLIMERÁZ LÁNCREAKCIÓ

Lényegében a DNS-ben kódolt információ kinyerése fehérjék előállítása (fehérje szintézis) céljából.. Átírás (transzkripció)

Polimeráz láncreakció

Elv: Ha az első primer rossz helyre köt, nagyon kicsi az esélye, hogy a másodiknak is legyen nem kívánt kötőhelye, azaz ezután is legyen nem kívánt termék...

MÓDSZEREI (BMEVESAM203) AZ ELVÁLASZTÁSTECHNIKA KORSZERŰ (BMEVEMBM203) ELVÁLASZTÁSTECHNIKA

15-30 nukleotid hosszúságú primer, a tapadási helye jelöli ki a felsokszorosítandó DNS szakasz kezdetét. •

 AzRNS átírásaésa fehérjékszintézisea sejtben  A DNS lemásolásaa sejtben  A DNS, RNS ésfehérjékszerkezetiösszehasonlítása 2. óra

 A mintául szolgáló szálat emiatt 3’  5’ irányba olvassa le a másolást végző enzim (DNS polimeráz)..  Az eredeti szállal két teljesen azonos kettős

1.1. POLIMERÁZ LÁNCREAKCIÓ

– Sokszor a PCR reakció az első lépés egy fehérje mesterséges, sejten kívüli (pl. gyógyászati célú) előállításához. – Vagy a mesterségesen előállított