Molekuláris biológiai módszerek
Vektorok
Klónozó és expressziós vektorok
Plazmidok
Prokariota Eukariota Fágok
M13
Lambda Kozmidok
Mesterséges kromoszómák
Plazmidok
3. Col plazmid: Kolicinogén faktorokat termelnek (antibiotikum) más baktériumok ellen
1. F plazmid (sex plazmid)
2. R plazmid: Antibiotikum rezisztencia
Önálló replikonok, ori replikációs origó, téta-replikáció, rolling-circle replikáció
Fágemid vektorok
Lineáris konkatamer
Carbanecillin
Ampicillin Tetracycline
30S alegységhez köt, AA-tRNS
kötését gátolja Transzpeptidázt
gátol, sejtfal nem épül fel
β-laktamáz 40 kDa membrán-
protein, antiporter
Chloramphenicol
Chloramphenicol acyltransferase Peptidil-transz- ferázt gátolja
Streptomycin
30S alegységhez kapcsolódik, formil- metionin kapcsoló- dását gátolja
Streptomycin
foszfotranszferáz
Kanamycin
30S alegységhez kapcsolódik, misz- transzlációt okoz
Kanamycin acyltransferase
Zeocin
DNS-t vágja
Zeocinhoz köt, inaktiválja
Blasticidin
Peptidkötés kialakulását gátolja
Blasticidin- S-deaminase
Hygromycin B
Fehérjeátíródás gátlása 2 módon is
Hygromycin B
phosphotransferase
Pro-, és eukarióta antibiotikumok
A molekuláris klónozás főbb lépései
Klónozás ragadós végekkel
Klónozás tompa
végekkel
Klónozás tompa végekkel +
linkerekkel
Klónozás
PCR-rel
A transzdukció mechanizmusa
Klónozás λ fágba
λ-fág
DNS
központi régió eltávolítása
idegen DNS beültetése λ DNS
λ „karok”
in vitro „csomagolás”
a kapszid fehérjékbe rekombináns,
fertőzőképes λ-fág
λ-fág, mint vektor
M13 alapú vektorok
Szelekció
β-galactosidase
permease
transacetylase repressor
protein
ONPG X-gal IPTG
ortho-Nitrophenyl- β-galactoside
(kolorimetria)
Isopropyl β-D-1-
thiogalactopyranoside (aktiváció)
kék-fehér szelekció
lacI lacZω
11-41. aminosavakat kódoló régió deléciója
lacZα
LacZα peptid
aktív β-galaktozidáz
X-gal kék színű
termék
inaktív β-galaktozidáz IPTG
inaktív LacI
A kék-fehér szelekció genetikai háttere
Fágemid vektorok
kétféle replikáció,
transzdukció, vagy transzformáció
