KÉT MÓDSZER A ZEARALENON ÖSZTROGÉN HATÁSÁNAK VIZSGÁLATÁRA ZEBRADÁNIÓN (DANIO RERIO)
Bakos Katalin1,2, Csenki Zsolt1, Kovács Róbert1, Kánainé Sipos Dóra1,2, Urbányi Béla1, Kovács Balázs1,2
1Szent István Egyetem, Mezőgazdaság- és Környezettudományi Kar, Környezet- és Tájgazdálkodási Intézet, Halgazdálkodási Tanszék, Gödöllő
2 Szent István Egyetem Környezetipari Regionális Egyetemi Tudásközpont, Gödöllő
Kivonat
A zearalenon egy Fusarium gomba fajok által termelt ösztrogén hatású mikotoxin. A takarmányok révén közvetlenül az élő szervezetbe vagy a gabonafélék feldolgozása során a melléktermékekbe, szennyvízbe kerül. Veszélyt jelenthet az érintkező szárazföldi és vízi ökoszisztémákra, a természetes ösztrogének analógjaként működve megzavarhat kulcsfontosságú élettani folyamatokat (ivarérés, fejlődés, szaporodás) is.
Az ösztrogén hatás kimutatása során használt egyik legismertebb biomarker a vitellogenin, amelynek termelődése szigorúan ösztrogénfüggő. A képződő terméket leggyakrabban ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) módszerrel vizsgálják, ami azonban meglehetősen költséges.
Kísérleteink célja a zearalenon vitellogenin termelődésre gyakorolt hatásának vizsgálata - zebradánió tejeseken (Danio rerio), valamint egy új, olcsóbb, a vitellogenin termelődését kimutató real-time PCR módszer kidolgozása volt.
A halakat 21 napig kezeltük 1 mg/l, 10 µg/l és 0,1 µg/l zearalenonnal félstatikus rendszerben. Pozitív kontrollként 100 ng/l 17-β-ösztradiolt használtuk.
A kezelt egyedekből teljes test homogenizátumot készítettünk, amelyből a vitellogenint fehérje szinten mutattuk ki zebradánióra kifejlesztett vitellogenin ELISA kit segítségével. Az mRNS szintű vizsgálatokhoz egy új, duplex real-time PCR módszert dolgoztunk ki, amellyel a homogenizátumban található vitellogenin RNS mennyiségét vizsgáltuk.
Megállapítottuk, hogy az újonnan kidolgozott módszer alkalmas az ösztrogén hatás (vitellogenin géntermék) érzékeny kimutatására és eredménye jól korrelál az általánosan használt ELISA eredményeivel. A zearalenon a legkisebb alkalmazott koncentrációban is indukálta a vitellogenin kifejeződését. A hatás koncentrációfüggő, de az összefüggés nem lineáris. A kidolgozott real-time PCR módszer lehetőséget nyújthat környezeti minták ösztrogén hatásának kimutatására is.
A munka Baross Gábor kutatási program (HALEDC09- REG-KM-09-2-2009- 0066) és TÁMOP-4.2.2.B-10/1-2010-0011 pályázatok támogatásával készül.
