BMEVESAA604 2022.03.01.
Analitikai és Szerkezetvizsgálati labor Tömegspektrometria
Tömegspektrometria (MS)
Mátyási Judit, Dr. Balla József
Laborjegy:
beugró zh, jegyzőkönyv minősége alapján +/- 1 jegy
Beugró zh:
MS előadás anyaga (a diasor plusz az elhangzottak!)
Diasor:
http://oktatas.ch.bme.hu/oktatas/konyvek/anal/
BSc-Analitikai-es-Szerkezetvizsgalati-Szaklabor/
MS_bevezeto_2022tavasz.ppt
Helyszín:
Ch. ép. fsz. 3.
2
Követelmények
1. Dinamikus tömegmérés i módszer
2. Csökkentett nyomású térben gerjesztés hatására a mintából keletkező ionokat gyorsító elektrosztatikus tér hatására olyan erőtérbe juttatjuk, ahol fajlagos tömegük (m/z) szerint elkülönülnek, és ezt követően egy detektorban mérjük az ionok intenzitását. Az ionintenzitás- fajlagos tömeg közötti függvénykapcsolat a
tömegspektrum . A tömegspektrum egyedi.
(Ujjlenyomat.)
A tömegspektrometria definíciója:
4
Tömegspektrum:
120 110
100 90
80 70
60 50
20 40 60 80 100 Rel.int.
%
m/z
GC-MS-DS
6
kapilláris kolonna split/splitless
injektor He
ionforrás analizátor detektor
vákuumrendszer
GC MS DS
adatfeldolgozás
spektrumtár
Forrpont és gázkromatografálhatóság
Injektor hőmérsékletén
bomlás nélkül elpárologtatható komponensek
vivőgáz
szeptum
"purge" gáz
üveg, kvarc betét (liner)
split mintaáram
leosztás változtatható áramlási
ellenállások
szeptum
8 8
82°C 56°C
83°C
Technológiai oldószermaradványok vizsgálata
10 10
x10 Ar
CH 4 CO
2 4 6 min
N 2
O 2
Gázelemzések
GC-MS-DS
kapilláris kolonna split/splitless
injektor He
ionforrás analizátor detektor
vákuumrendszer
adatfeldolgozás spektrumtár
!
GC-MS-DS
12
• folyadék
• HS analízis
• SPME
• ITEX
Automata
• folyadék
• HS analízis
• SPME
• ITEX
Automata
mintaadagoló
GC-MS/MS-DS
14
Automata
• folyadék
Direkt mintabevitel
16
1. Ionforrás:
1. EI (Electron Impact, elektronütközéses)
2. CI (Chemical Ionization, kémiai ionizációs)
2. Analizátor
1. Elektromos
1. Kvadrupól 2. Ioncsapda
2. Kettős fókuszálású (mágneses+elektrosztatikus) 3. TOF (time of flight, repülési idő)
4. Orbitrap
3. Detektor
1. Elektronsokszorozó
2. Fotoelektronsokszorozó
A tömegspektrométer egységei
Ionforrás
Elektronütközéses (EI, Electron Impact)
minta (M)
izzó katód
anód
gyorsító elektród
+ + +
(+) ionnyaláb repeller
ionoptika
N
S
elektron nyaláb
U
- U = 1-100kV
permanens mágnes
Ionforrás
Elektronütközéses (EI, Electron Impact)
18
Ionforrás
Elektronütközéses (EI, Electron Impact)
20
Ionforrás
Elektronütközéses (EI, Electron Impact)
Ionforrás
Elektronütközéses (EI, Electron Impact)
1. A molekula ionizációja
M + e - M .+ + 2e -
2. Hasadás és/vagy átrendeződés
M .+ m 1 + + . (m 2 …m n ) m 1 m 2 + + . (m 3 …m n ) m 1 m 2 m 3 + + . (m 4 …m n )
…
Ionkémiai folyamatok
A molekulaion szimultán, monomolekuláris fragmentálódási reakciókban vesz részt, melyek mindig ugyanakkora valószínűséggel, aránnyal játszódnak le.
22
Miért pont 70 eV?
Q (10 -16 cm 2 )
Elektron energia (eV)
Néhány C 2 -C 6 közötti szénatomszámú, oxigéntartalmú szerves vegyület
elektronütközéses hatáskeresztmetszet (Q) görbéje
Az ionizáló feszültség hatása a fragmetációra
24
M = 42,08 g/mol
He és a 70 eV
• A He is ionizálódik 70 eV mellett, csak viszonylag kis mértékben a nagy IE miatt
vegyület eV vegyület eV vegyület eV
nitrogén 15,58 kloroform 11,42 kén-dioxid 12,34
oxigén 12,08 1,2-diklór-etán 11,12 kén-hidrogén 10,46 víz 12,59 vinil-klorid 10 karbonil-szulfid 11,18 szén-monoxid 14,01 diklór-etilén 9,83 szén-diszulfid 10,08 szén-dioxid 13,79 triklór-etilén 9,45 tiokarbinol 9,44
nitrogén-oxid 9,25 fenol 8,5 dimetil-szulfid 8,69
nitrogén-dioxid 9,78 piridin 9,32 dimetil-diszulfán
8,46
klór 11,48 benzol 9,25 formaldehid 10,87
jód 9,28 toluol 8,82 acetaldehid 10,21
metán 12,98 xilol 8,45 akrolein 10,1
etilén 10,52 sztirol 8,47 aceton 6,69
acetilén 11,41 anilin 7,7 metanol 10,85
butén-1 9,58 ammónia 10,15 etanol 10,48
n-hexán 10,17 metil-amin 9,97 hangyasav 11,05
metil-klorid 11,28 acetonitril 12,22 ecetsav 10,37
széntetraklorid 11,47 akril-nitril 10,91 He 24
Néhány vegyület első ionizációs potenciálja
Ionforrás
Kémiai ionizációs (CI, Chemical Ionization)
26
Reagens gáz:
CH 4 , NH 3 , propán, PB
izzó katód
anód
gyorsító elektród
+ + + repeller
CH 5 +
minta (M)
Analizá tor
CH 4 + e - CH 4 . + +2 e -
CH 4 + CH 4 . + CH
3 . + CH
5 +
CH 3 . + CH
4 C 2 H 5 + + H 2
CH 5 + + M CH 4 +[M+H] +
C 2 H 5 + + M [M+ C 2 H 5 ] +
EI és CI ionforrásból származó tömegspektrumok
M = 194,23 g/mol
Analizátor Kvadrupól
28
Mass Spectrometry, 2017, Jürgen H. Gross
Analizátor
Kvadrupól
30
Analizátor
Kvadrupól
Analizátor : kvadrupól
x,y
z
Gyorsítófeszültség, ionoptika
32
Analizátor
Kvadrupól
Analizátor : kvadrupól
34
Analizátor : kvadrupól
Analizátor : kvadrupól
Gain
36
Analizátor : kvadrupól
Gain
Analizátor : kvadrupól
Gain
38
Analizátor : kvadrupól
Gain
Analizátor : kvadrupól
Gain
40
Analizátor : kvadrupól
Offset
Analizátor : kvadrupól
Offset
42
Analizátor : kvadrupól
Offset
Analizátor : kvadrupól
Offset
44
Analizátor : kvadrupól
Offset
Analizátor : kvadrupól
Ion Bridge
46
Analizátor felbontóképessége
10%
50%
m 2 m 1 m 2
m 1
Tömegspektrumok
48
Analizátor felbontóképessége
Pontos tömeg = elemösszetétel
• C 20 H 44 N 3 O 6 422,322991 amu
• C 20 H 46 N 4 O 3 422,346800 amu
• C 22 H 42 N 6 O 2 422,336906 amu
• C 24 H 40 NO 5 422,290631 amu
• C 29 H 42 O 2 422,318464 amu
szerkezeti információ !
Detektor
Elektronsokszorozó
• A dinódák Cd bevonattal vannak ellátva, kicsi az elektronok kilépési munkája.
• 16 db dinóda (az ábrán csak 8) 2 16 db elektront eredményez, tehát 1 db
kiütött elektron 2 16 db szekunder elektront produkál.
• Egy adott m/z ion jelintenzitását a becsapódó fragmens ionok által kiütött primer elektronok mennyisége szabja meg. (Ez azonban függvénye a fragmens ion számszerűen nem ismert tulajdonságának.)
dinódák
50
channeltron
Vákuumrendszerek
Analitikai készülékek: kétfokozatú
1. fokozat:
elővákuum-rotációs szivattyú (10 2 kPa - 0.1-1 kPa-ig) 2. fokozat:
turbomolekuláris szivattyú
(0.1-1 kPa-ról 10 -6 -10 -7 kPa-ig)
GC-MS-DS
52
kapilláris kolonna split/splitless
injektor He
ionforrás analizátor detektor
vákuumrendszer
GC MS DS
adtafeldolgozás spektrumtár
Vákuum molekulák szabad úthosszának növelése
Kétfokozatú vákuumrendszer
Olajrotációs szivattyú elővákuum előállítása
Turbomolekuláris szivattyúk nagyvákuum előállítása
10 -3 – 10 -4 Pa nagyvákuum 10 1 – 10 -1 Pa
elővákuum
Olajrotációs (csúszólapátos) szivattyú
Elővákuumot hoz létre, 10 1 - 10 -1 Pa
• Excentrikusan csapágyazott forgórész
• Forgás közben növekvő (itt áramlik be a gáz), majd csökkenő térfogatot zárnak be a lapátok
• Centrifugális erő szorítja a lapátokat a falhoz
• Térfogat kiszorításos elv
• Olajozás
54
Olajrotációs (csúszólapátos) szivattyú
Turbomolekuláris szivattyú
• Nagyvákuumot hoz létre, 10 -3 - 10 -4 Pa
• 50.000-90.000 ford./min, elővákuumra van szüksége
• „kipofozás”
56
Turbomolekuláris szivattyúk
Q
Turbomolekuláris szivattyúk
58
Q Q Q
Pirani-cső
• elővákuumot méri
• nyomás mérése hővezetőképesség mérésére visszavezetve
vö: hővezetőképességi detektor
B K
M R
vivőgáz
B K
M R
vivőgáz
a) b)
mikro-TCD
Pirani-cső
vö: EI ionforrás
Ionizációs vákuumérő
60
• nagyvákuumot méri
• ionizációs elven mér
minta (M)
izzó katód
anó d
gyorsító elektród
+ + +
(+) ionnyalá
b repell
er
ionopti ka
N
S
elektron nyaláb
U
- U = 1- 100kV
permanens
mágnes
GC-MS rendszerből származó információ
SCAN SIM
62
GC-MS rendszerből származó információ
1. kromatogram (TIC, teljes ionáram kromatogram)
SCAN
GC-MS rendszerből származó információ
1. kromatogram (TIC, teljes ionáram kromatogram)
64
GC-MS rendszerből származó információ
1. kromatogram (TIC, teljes ionáram kromatogram)
M .+ m 1 + + . (m 2 …m n ) m 1 m 2 + + . (m 3 …m n ) m 1 m 2 m 3 + + . (m 4 …m n )
SCAN …
+
GC-MS rendszerből származó információ
1. kromatogram (TIC, teljes ionáram kromatogram)
100 200 300 400 500 600
0 50 100
% 91
65 171 218 298
32 112 265 355 390 446 487 519 589
100 200 300 400 500 600
0 50 100
% 91
65 171 218 298
32 112 265 355 390 446 487 519 589
100 200 300 400 500 600
0 50 100
% 91
65 188 288 318 375 441 477 567
30 111 150
1.0(x10,000)
91
2. tömegspektrum
(abszolút, karakterisztikus)
SCAN 66
TIC kromatogram
TIC kromatogram
Karakterisztikus tömegspektrum
• m/z intenzitások bázisionra vannak normálva
• „ujjlenyomat”
Bázision: 91 m/z Molekulaion: 92 m/z
68
30.0 35.0 40.0 45.0 50.0 55.0 60.0 65.0 70.0 75.0 80.0 85.0 90.0 95.0 100.0 105.0 110.0 115.0
0.0 5.0
(x1,000)
91
39 45 51 62 65 77 93
37 53 85
28
toluol (M= 92 g/mol)
SCAN
Minőségi elemzés
• Minőségi információ
• retenciós idő
• karakterisztikus tömegspektrum
• irodalmi adatbázisokkal való összehasonlítás: NIST, Wiley adatbázisok, 350.000-400.000 MS spektrum
• spektrumfejtés
Mennyiségi elemzés
Csúcs alatti terület
SCAN SIM 70
SIM méréstechnika (Selected Ion Monitoring)
szelektív ionkövetés
0 25 50 75 100
%
244
202
fluorantén
p-terfenil-D14
pirén
40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 m/z
0.00 0.25 0.50 0.75 1.00
Inten.(x10,000)
202
101
88 150 174
74 126
50 62 110 122 163 187
39 134
SCAN és SIM méréstechnika
• SCAN mód: teljes tömegskálát pásztáz (szkennel) végig, eredménye : tömegspektrum
kromatogram generálás: minőségi, mennyiségi analízis
• SIM mód: Szelektív ionkövetés (Selected Ion Monitoring), egy vagy több kiválasztott fragmens mérése,
kisebb a kimutatási határ a scan felvételhez képest:
mennyiségi analízis
Méréskor beállítandó: Tömegtartomány (pl. 30-250 m/z vagy 91 m/z) Spektrumfelvételi idő (0,1-1 sec)
SCAN SIM 72
GC-MS rendszerből származó információ
SCAN SIM
74
GC-MS/MS rendszerből származó információ
Ütközési cella
76
GC-MS/MS rendszerből származó információ
SCAN
SIM
GC-MS/MS rendszerből származó információ
SCAN SIM
SCAN SCAN
SCAN
SIM
78
GC-MS/MS rendszerből származó információ
1. Precursor ion scan mode
FAME
McLafferty
m/z=74
GC-MS/MS rendszerből származó információ
2. Neutral loss
80
GC-MS/MS rendszerből származó információ 2. Neutral loss
Cl .
GC-MS/MS rendszerből származó információ
3. Product ion scan
82
GC-MS/MS rendszerből származó információ
3. Product ion scan
Aszpirin-TMS Ibuprofen-TMS
Gemfibrozil-TMS Paracetamol-2TMS
Lidokain-TMS
Diklofenák-TMS
Karbamazepin-TMS Triklozán-TMS
Pentoxifillin Koffein
Vajda Viktória Mátyási Judit
GC-MS/MS rendszerből származó információ
3. Product ion scan
84
GC-MS/MS rendszerből származó információ
3. Product ion scan
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
73
160
117 234263
145 278
61 205 325358 404 456 512 577
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
73
267
149 209 233 115 175
65 282 355 407441477 521 574
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
206
73 280
116
135165 237
61 309 341 386415445478517 585
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
86
220
204
145 291
116 247 490
61 374 420 525559589
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
194
109
67
137165
65 281 314346 392432463 520550 597
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
83
201
122129 179
61 217250 307 341 404 461 545579
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
200
345
73 185 310
63 125 219 274
367403 461 528 595
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
193
73
221 355
147 281 429
165 267 327 401
117 369 475503
63 535563 594
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
73 214242
277 367
179 352
151
61 103 245 308 415 475 530 595
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
221
193 109 180
278 67 137
261 313341375 430 481513 571 62
Vajda Viktória Mátyási Judit
GC-MS/MS rendszerből származó információ
3. Product ion scan
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
73
160
117 234263
145 278
61 205 325358 404 456 512 577
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
73
267
149 209 233 115 175
65 282 355 407441477 521 574
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
206
73 280
116
135165 237
61 309 341 386415445478517 585
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
86
220
204
145 291
116 247 490
61 374 420 525559589
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
194
109
67
137165
65 281 314346 392432463 520550 597
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
83
201
122129 179
61 217250 307 341 404 461 545579
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
200
345
73 185 310
63 125 219 274
367403 461 528 595
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
193
73
221 355
147 281 429
165 267 327 401
117 369 475503
63 535563 594
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
73 214242
277 367
179 352
151
61 103 245 308 415 475 530 595
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
221
193 109 180
278 67 137
261 313341375 430 481513 571 62
86
GC-MS/MS rendszerből származó információ
3. Product ion scan
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
73
160
117 234263
145 278
61 205 325358 404 456 512 577
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
73
267
149 209 233 115 175
65 282 355 407441477 521 574
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
206
73 280
116
135165 237
61 309 341 386415445478517 585
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
86
220
204
145 291
116 247 490
61 374 420 525559589
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
194
109
67
137165
65 281 314346 392432463 520550 597
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
83
201
122129 179
61 217250 307 341 404 461 545579
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
200
345
73 185 310
63 125 219 274
367403 461 528 595
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
193
73
221 355
147 281 429
165 267 327 401
117 369 475503
63 535563 594
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
73 214242
277 367
179 352
151
61 103 245 308 415 475 530 595
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100%
221
193 109 180
278 67 137
261 313341375 430 481513 571 62
Paracetamol-2TMS
Vajda Viktória Mátyási Judit
GC-MS/MS rendszerből származó információ 3. Product ion scan
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100 %
206
73 280
116
135 165 237
61 309 341 386415 445 478 517 585
Paracetamol-2TMS
206 73
M=295,53 g/mol
88
GC-MS/MS rendszerből származó információ 3. Product ion scan
0,000 0,200 0,400 0,600 0,800 1,000 1,200
10 13 16 19 22 25 28 31 34 37 40
A b szo lú t in te n zi tás [- ]
Feszültség [V]
206,00>73,10
280,00>206,10
100 200 300 400 500 600
0 25 50 75 100 %
206
73 280
116 165
135 237
61 309 341 386415 445 478 517 585
206 73
Vajda Viktória Mátyási Judit
GC-MS/MS rendszerből származó információ 3. Product ion scan
0,000 0,200 0,400 0,600 0,800 1,000 1,200
10 13 16 19 22 25 28 31 34 37 40
A b szol ú t in te n zi tás [- ]
Feszültség [V]
206,00>73,10 280,00>206,10
13.25 13.50 13.75 14.00 14.25 14.50 14.75 15.00 15.25 15.50 15.75 16.00 16.25
-2.0 -1.5 -1.0 -0.5 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0
(x10,000)
10 V 15 V 40 V 35 V 30 V 25 V 20 V
Compound Name Ret. Index Ion1 Ion2 Ion3
Type m/z CE Ratio Type m/z CE Ratio Type m/z CE Ratio
Aszpirin 2 TMS 0 T 267,00>73,10 20 100,00 Ref.1 209,00>91,00 15 13,40 Ref.2 267,00>149,10 10 11,84
Ibuprofen TMS 0 T 160,00>117,10 20 100,00 Ref.1 160,00>145,10 15 40,01 Ref.2 117,00>115,00 15 33,13
Paracetamol 2 TMS 0 T 206,00>73,10 20 100,00 Ref.1 280,00>206,10 15 85,98 Ref.2 206,00>91,10 15 61,88
Lidokain TMS 0 T 86,00>58,10 10 100,00 Ref.1 235,00>220,20 10 60,73 Ref.2 235,00>73,20 20 45,54
Koffein 0 T 194,00>55,00 20 100,00 Ref.1 194,00>109,00 10 79,31 Ref.2 194,00>66,00 40 64,37
Lidokain 0 T 120,00>113,00 20 100,00 Ref.1 120,00>89,00 20 98,98 Ref.2 120,00>69,00 25 95,92
Gemfibrozil TMS 0 T 201,00>83,20 10 100,00 Ref.1 201,00>55,10 25 84,40 Ref.2 201,00>73,10 25 26,31
Indol-3-propionsav TMS 0 T 202,00>73,10 20 100,00 Ref.1 333,00>73,20 30 24,12 Ref.2 333,00>202,20 15 12,33
90
GC-MS/MS rendszerből származó információ 4. MRM
(Multiple Reaction Monitoring)
206 73
206
73
206 73
20 V
Vajda Viktória Mátyási Judit
GC-MS/MS rendszerből származó információ 4. MRM
(Multiple Reaction Monitoring)
92
GC-MS/MS rendszerből származó információ
Bűzforrás
Adszorpciós mintavétel
Permanens gázok elemzése
Barlangi levegő összetételének meghatározása
94
Permanens gázok elemzése
Barlangi levegő összetételének meghatározása
Policiklusos aromás vegyületek (PAH-ok) meghatározása
96
ng/ml !
Transzformátorolaj
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 1.1 1.2
(x10,000,000)
Transzformátorolaj
DBDS (dibenzil-diszulfid) tartalom meghatározása
98
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 1.1 1.2
(x10,000,000)
1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
Inten.(x1,000)
91
65
Transzformátorolaj
DBDS (dibenzil-diszulfid) tartalom meghatározása
Klórbenzolok mérése felszín alatti vizekből
100 Komponens t R
klórbenzol 5.947
1,3-diklórbenzol 10.989 1,4-diklórbenzol 11.981 1,2-diklórbenzol 13.347 1,3,5-triklórbenzol 14.298 1-bróm-4-klórbenzol 16.188 1,2,4-triklórbenzol 17.742 1,2,3-triklórbenzol 19.793 1,2,3,5-tetraklórbenzol 21.380 1,2,4,5-tetraklórbenzol 21.728 1,2,3,4-tetraklórbenzol 24.600 pentaklórbenzol 26.714
hexaklórbenzol 30.455
Mébold Bence, Mátyási Judit
Klórbenzolok mérése felszín alatti vizekből
5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 min
0.0 2.5 5.0 7.5
uV(x1,000)
Chromatogram
5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 min
0.0 2.5 5.0 7.5
uV(x1,000)
Chromatogram
standard
minta
Klórbenzolok mérése felszín alatti vizekből
102
24.50 24.75 25.00 25.25 25.50 25.75 26.00 26.25 26.50 26.75 27.00 27.25 27.50 27.75 28.00 28.25 28.50 28.75 min
-0.5 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5
uV(x1,000)15.0 15.5 16.0 16.5 17.0 17.5 18.0 18.5 19.0 19.5 20.0 20.5 21.0 21.5 22.0 22.5 23.0 23.5 min
-1.0 -0.5 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
uV(x1,000)
Mébold Bence, Mátyási Judit
5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0 min
0.0 2.5 5.0 7.5
uV(x1,000)
Chromatogram
Klórbenzolok mérése felszín alatti vizekből
7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 25.0 27.5 30.0
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0
(x100)
3.0 4.0 5.0 6.0
(x100)
