F-box gén alapú S-genotípus-meghatározás

Az AprSFB-F1/R primerpárral az SFB_C-allél minden más SFB-alléltól jól elkülöníthe-tő a 358 bp hosszú inszerció miatt. Így ezen primerek használatával leheelkülöníthe-tőség nyílik az S_C -haplotípus markerezésére. Az inszerció nélküli SFB-allélok (SFB1-₂₀) hossza nem mutat olyan mértékű polimorfizmust, hogy azt agarózgélen detektálni tudjuk, így mindegyikből közel azonos méretű fragmentum amplifikálódik. A korábbi vizsgálataink során, ha az S-RN-áz gén 1. és 2. intronrégiója alapján csak egy, az S8- vagy S_C-RN-áz méretére jellemző fragmentumot sikerült amplifikálnunk, a fajta pontos S-genotípusa és termékenyülési fenotípusa sem volt meghatározható, hiszen egyaránt hordozhatta az S8- (önmeddő) vagy SC-RN-ázt (önterméke-nyülő). Az AprSFB-F1/R primerpárral azonban az is kimutathatóvá vált, hogy az adott fajta homo- vagy heterozigóta az S-lókuszban. E primerekkel mintegy 32 ismeretlen genotípusú vagy vitatott termékenyülésű fajta pontos S-genotípusát tudtuk meghatározni (11. ábra), me-lyeket a korábbi vizsgálatainkkal nem sikerült jellemezni.

[Eredmények 83

11. ábra. Kajszifajták PCR-analízise az SFB-gént amplifikáló AprSFB-F1 és AprSFB-R konszenzus primerekkel. M: 1-kb + DNS-marker, 1. ‗Harmat‘, 2. ‗Konzervnij pozdnij‘, 3. ‗Mamaia‘, 4.

‗Mandulakajszi‘, 5. ‗Callatis‘, 6. ‗Ananasznij cjurpinszkij‘, 7. ‗Csacsanszko zlato‘, 8.

‗Crvena ungarska‘, 9. ‗Darunek malahojeva‘, 10. ‗Effekt‘, 11. ‗Krimszkij Amur‘, 12.

‗Paszinok‘, 13. ‗Pisana‘, 14. ‗Sirena‘, 15. ‗Kâszna ungarska‘, 16. ‗Nyujtó Ferenc emléke‘, 17. ‗Paksi magyar kajszi‘, 18. ‗Roxana‘, 19. ‗Nyikitszkij‘, 20. ‗NJA-8‘, 21. ‗Sulmona‘, 22.

‗Venus‘, 23. ‗Zaposzdolje‘, 24. ‗Rózsakajszi C.1406‘, 25. ‗Ceglédi kedves‘, 26. ‗Pannónia‘, 27. ‗Magyar kajszi C. 235‘, 28. ‗Andornaktályai magyar kajszi‘, 29. ‗Rakovszky‘, 30.

‗Nagygyümölcsű magyar kajszi‘, 31. ‗Borsi-féle kései rózsa‘, 32. ‗Ceglédi óriás‘, 33. ‗Ligeti óriás‘, 34. ‗Krimszkij Medunec‘, 35. ‗Ceglédi arany‘.

Az SFB-gén alapú PCR-analízissel azonosítható volt a közép-európai régióban megha-tározó jelentőségű Magyar kajszi fajtakörbe tartozó fajták S-genotípusa. A fajtakör Magyaror-szágról, Ukrajnából, Szerbiából, Macedóniából, Bulgáriából és Romániából származó fajtái-nak genotípusa egyaránt S_CS₈-nak adódott. Az S₈-allél a másik jelentős magyar fajtakör, az Óriás fajtacsoport valamennyi fajtájából is kimutatható volt. Érdekes, hogy míg a magyar kajszifajták között az S8-allél viszonylag gyakran fordult elő, a Magyar kajszi fajtakörön kívül csak két ukrán és egy olasz fajtából volt kimutatható.

9. táblázat. Néhány kajszifajta és -hibrid termékenyülési fenotípusának vizsgálata geitonogám önbeporzással (Szigetcsép, 2006).

[Eredmények 84 Összesen 55 fajta S-genotípusát határoztuk meg, melyeket egy összefoglaló táblázatba gyűjtöttük, az eredményeket szolgáltató vizsgálati módszereket is feltüntetve (11. táblázat). A fehérje- és DNS-alapú analíziseket néhány fajta esetében szabadföldi vizsgálatokkal is kiegé-szítettük. Az öntermékenyülési képességet hat fajtánál geitonogám megporzással ellenőriztük (9. táblázat). A Viti és mts. (1997) által megadott 5 % határérték alatti gyümölcskötődést te-kintettük önmeddő genotípusnak. Az öntermékenyített ‗Korai piros‘ (37,5 %) és az ‗NJA 8‘

(12,1 %) terméskötődése is meghaladta ezt a küszöbértéket, míg a ‗Krimszkij Medunec‘ (2,7

%), a ‗Harmat‘ (4,3 %) és a ‗Korai zamatos‘ (3,5 %) fajtáknál 5 % alatti kötődést kaptunk. A

‗Korai piros‘ (SCS20) × ‗Ceglédi óriás‘ (S8S9) keresztezés során 128 megporzott virágból 39 gyümölcs kötődött, ami 30,5 %-os kötődési arányt jelent. Ha a ‗Korai piros‘ is S₉-allélt tar-talmazott volna, ahogyan azt az RN-áz 2. intronrégióját amplifikáló PCR-vizsgálat eredmé-nyei alapján feltételeztük (8. ábra), az adott kombináció gyakorlatilag inkompatibilis lett vol-na.

A vizsgált fajták közül 14 önmeddő, 41 öntermékenyülő, ez utóbbiak közül 11 fajta homozigóta genotípusú (S_CS_C). A vizsgált 55 fajta közül az S₈-allél 19, az S₂-allél 12, az S₁ -allél 4, az S9-allél 4, az S₁₃-allél 3, az S₁₀-, S₁₁- és S₂₀-allélok 2–2, az S₁₂- és S_14-19-allélok egy–

egy fajtában fordultak elő.

[Eredmények 85 10. táblázat. Kajszifajták inter-inkompatibilitási csoportjai és az univerzális pollenadókat

magába foglaló öntermékenyülő és önmeddő genotípusok. Az aláhúzott fajták genotípusai az alábbi forrásmunkákból származnak: Egea és Burgos (1996), Burgos és mts. (1998), Alburquerque és mts. (2002), Sutherland és mts. (2004)

Csoport Fajta S-genotípus

Ananasznij cjurpinszkij (S_CS_C); Borsi-féle kései rózsa (S_CS_C); Ceglédi kedves (S_CS_C); Currot (S_CS_C); Ginesta (S_CS_C); NJA-8 (S_CS_C); Nyujtó Ferenc emléke

Andornaktályai magyarkajszi (S_CS₈); Csacsanszko zlato (S_CS₈); Marculesti 5/5 (S_CS₈); Crvena ungarska (S_CS₈); Darunek malahojeva (S_CS₈); Effekt (S_CS₈);

Gönci magyarkajszi (S_CS₈); Kâszna ungarska (S_CS₈); Krimszkij Amur (S_CS₈);

Magyarkajszi C. 235 (S_CS₈); Nagygyümölcsű magyarkajszi (S_CS₈); Nyikitszkij (S_CS₈); Paksi magyarkajszi (S_CS₈); Pisana (S_CS₈); Venus (S_CS₈);

Ceglédi arany (S_CS₉); Ceglédi bíborkajszi (S_CS₉); Korai piros (S_CS₂₀); Mari de Cenad (S_CS₁₉); Modesto (S_CS₁₃);

*A ‗Colorao‘ fajtát S-genotípusa alapján Vilanova és mts. (2005) az univerzális pollenadókhoz sorolták, de figyelmen kívül hagyták, hogy a fajta hímsteril (Burgos és mts., 1998)

I.

[Eredmények 86 11. táblázat. A vizsgált kajszifajták S-genotípusa, az annak meghatározására használt

módsze-rek és a fajták termékenyülési fenotípusa Fajta Az S-genotípus

megha-tározásának módszere

S-genotípus Termékenyülés^c

Aurora R1, R2 S17- Önmeddő

Ananasznij cjurpinszkij R1, FB SCSC Öntermékenyülő

Andornaktályai magyar kajszi R1, R2, FB SCS8 Öntermékenyülő

Antonio Errani R1, R2, FB S1S4 Önmeddő

Nagygyümölcsű magyar kajszi R2, FB SCS8 Öntermékenyülő

Ninfa R1, R2, FB S1S2 Önmeddő

Nyikitszkij N, R1, R2, FB SCS8 Öntermékenyülő

NJA-8 N, R1, R2, FB, Sz SCSC Öntermékenyülő

Nyujtó Ferenc emléke R1, R2, FB SCSC Öntermékenyülő

Paksi magyar kajszi R2, FB SCS8 Öntermékenyülő

[Eredmények 87 Fajta Az S-genotípus

megha-tározásának módszere

S-genotípus Termékenyülés^c

Pannónia R1, R2, FB SCSC Öntermékenyülő

Pasinok R1, FB SCSC Öntermékenyülő

Pisana R1, FB SCS8 Öntermékenyülő

Priboto R1, R2, FB S1S2 Önmeddő

Rakovszky R1, R2, FB SCS2 Öntermékenyülő

Roxana R1, R2, FB SCS2 Öntermékenyülő

Rózsakajszi C.1406 R2, FB SCSC Öntermékenyülő

Sirena R1, FB SCSC Öntermékenyülő

Sulmona N, R1, FB SCSC Öntermékenyülő

Toyuda R1, R2 SCS2 Öntermékenyülő

T-8 N, R1, R2 S13S14 Önmeddő

Venus N, R1, R2, FB SCS8 Öntermékenyülő

Voszki N, R1, R2 S11S13 Önmeddő

Zaposzdolje N, R1, FB SCSC Öntermékenyülő

Zard N, R1, R2, FB S16- Önmeddő

aR1: az S-RN-áz gén 1. intronrégiójának PCR-vizsgálata; R2: az S-RN-áz gén 2. intronrégiójának PCR-vizsgálata; FB: az F-box gén PCR-analízise; N: nem egyensúlyi izoelektromos fókuszálás (NEpHGE); Sz: szabadföldi öntermékenyítés

bAz S2- és S2m-allélok funkcionális különbözőségének igazolása további vizsgálatokat igényel

cA félkövér betűvel szedett termékenyülési fenotípus tisztázása vagy igazolása vizsgálataink eredmé-nye

– Olyan allél, amelynek meghatározása egyik módszerrel sem volt eredményes

[Eredmények 88

5.5 Az őszibarackra tervezett SSR-primerkészlet alkalmasságának