Monoklonális antitestek gyártása
Monoklonális antitestek gyártása
MAB-üzem elrendezési
képe
MAB-üzem elrendezési
képe
Bioreaktorok Bioreaktorok
Emlős sejtek félfolytonos, vagy folytonos, sejtvisszatartásos fermentációja.
Hígítási sebesség: 0,5-1,0 /nap Lassú, többhetes folyamat.
MAB-előállítás folytonos fermentációval
MAB-előállítás folytonos fermentációval
Sejtek elválasztása Sejtek elválasztása
Az állati sejteket 0,65 μm pó- rusméretű mikroszűrővel vá- lasztják el. A szűrőlepény le- rakódásának megakadályo- zására a levet diaszűrőben cirkuláltatják (keresztáramú szűrés). Az oldott fehérjéket a sejtek közül sóoldattal
(PBS = phosphate buffered saline, foszfáttal pufferolt só- oldat) mossák ki.
Mikroszűrő membránok Mikroszűrő membránok
Üregesszál (= „hollow fiber”) modulok.
Affinkromatográfia Affinkromatográfia
Az antitesteket olyan affinkro- matográfiás tölteten kötik meg, amelynek liganduma a Sta- phylococcus Protein A fehérjé- je. Ez az antitestek közös, Fc
régiójához kapcsolódik, azaz minden antitestet megköt, más fehérjéket viszont nem.
A MAB fehérjeszerkezete
A MAB fehérjeszerkezete
Protein A-affinkromatográfia Protein A-affinkromatográfia
Előnyei:
– Szelektíven köti az antitesteket
– Nagy a kapacitása (15–30 g/liter töltet) Hátrányai:
– Drága: 8000–10 000 USD/liter
(300 l-es oszlop esetén 10 000 USD/l-rel számolva egy töltet ára 3 millió $, amivel csak 15-20 tisztítási művelet végezhető el.)
– Toxikus
– Továbbjuthat, szennyezhet az elválasztás során
Ipari méretű kromatográfiás oszlop, d » h
Ipari méretű kromatográfiás oszlop, d » h
Ioncsere kromatográfia 1 Ioncsere kromatográfia 1
Erős kationcserélő gyantán.
Cél: a főtermék megkötése, a szennyező anyagok kimosá- sa, azután a MAB elúciója.
Kiegyenlítő puffer: pH = 4,5 Mosás: pH = 5,0
pH-gradiens: pH 5,4→8,0
A kolonna regenerálása: cc
MAB kromatogramja kationcserélőn
MAB kromatogramja kationcserélőn
Ioncsere kromatográfia 2.
Ioncsere kromatográfia 2.
Tisztítás anioncserélő gyantán.
Cél: a szennyező anyagok meg- kötése, a főtermék kötődés nél- kül átmegy az oszlopon.
Kiegyenlítő puffer: pH = 7,0
Elúció: pH= 7,0 (75 mM foszfát) A kolonna regenerálása: sóol- dattal (0,5 M foszfát)
Vírusok eltávolítása/inaktiválása
Vírusok eltávolítása/inaktiválása
A MAB-oldat koncentrálása ultraszűréssel A MAB-oldat koncentrálása ultraszűréssel
A fermentlé MAB-koncentráci- ója 100–150 mg/l. A végter- mékben 10-20 g/l-re van szük- ség, a koncentrálás legkímé- letesebb módja az ultraszűrés.
A MAB móltömege 180-190 kDa, ez alatti vágású memb- rán szükséges.
Formulázás, szűrés Formulázás, szűrés
Hozzáadják a végső formu- lázáshoz szükséges anya- gokat:
Puffer: nem illékony, pl. PO4
ionerősség beállítása: NaCl Fagyvédő anyagok: pl. sza- haróz, mannit, glicerin
Töltőanyag: pl. glicin
Egy kiszerelt MAB-készítmény összetétele
Egy kiszerelt MAB-készítmény összetétele
A monoklonális antitestek piaca A monoklonális antitestek piaca
Robbanásszerűen bővül.
Jelenleg ~100 MAB-készítmény van forgalomban, de ~500 van engedélyezés alatt az FDA-nál.
Előrejelzések szerint 2012-re az összes biológiai gyártású gyógyszer piacának felét a MAB-ok fogják kitenni (árbevé- telben kifejezve).
