A bőrödéma vizsgálata …

A CRD értékű UVB besugárzás után nem volt szignifikáns különbség a CPD pozitív sejtek számában, ami azt igazolja, hogy ezek a dózisok sejt szinten is összehasonlítható fokú fénykárosodást eredményeznek, annak ellenére, hogy a dózisok abszolút értékei különbözőek (4. f ábra).

4.1.3. A bőrödéma vizsgálata

A bőr vastagodásának numerikus leírása érdekében egy mérőszámot alkottunk, a bőrödéma hányadost. Ez utóbbit úgy határoztuk meg, hogy a besugárzott és nem besugárzott helyeken mért bőrvastagság értékeket elosztottuk (5.a ábra). A C57BL/6 egerekben a bőrödéma aránya 1,46 (SD ± 0,08) volt, ami 46% -os vastagodást jelentett.

A Balb/c és SKH-1 csoportokban a CRD-nél a megfelelő értékek 21% (1,21 ± 0,09) és 72% (1,72 ± 0,09) volt. Ezenkívül a bőr vastagságát ex vivo optikai koherencia tomográfiával is meghatároztuk. A 5.b ábra bal oldali oszlopa genotípusonként egy egér reprezentatív OCT képeit mutatja (CRD-értékek: 40mJ/cm² a C57BL/6-ban, 60mJ/cm² a Balb/c esetében és 80 mJ/cm² az SKH-1 egérnél), míg a jobb oldali oszlopban a vastagság átlagértékei megjelennek minden genotípus esetén, az összes kísérletben résztvevő egér adatai alapján.

Az OCT-mérések azt mutatták, hogy az egér bőrének reakciója az UV-vel szemben 4. ábra A CRD, a bőr eritémájának és a fénykárosodásnak a vizsgálata

a: Az UV-besugárzás gyakorlati kivitelezése. Az adott egértörzsre jellemző bőrreakciók 48 órával egyetlen UVB-besugárzás után láthatók. b: A besugárzott egerek hátbőrének reprezentatív ex vivo mintái. A besugarazott területeket a sarkokon tintával jelöltük c:

Clinically Relevant Dose értékek az egyes genotípusú egereknél. d: A bal oldali panelen a klinikai pontozás alapján a különféle csoportok átlagos eritéma értékeit tüntettük fel, a pontérékeket úgy számoltok, hogy 0 – a nem látható, 1 – közepes, 2 erős eritéma. A jobb oldali panel az eritéma objektív elemzését mutatja, az értékeket relatív vörösség hányadosként (Rrr) adjuk meg. Rrr a besugárzott területek eritémájának mértéke ugyanazon egér ál-besugárzott hátbőrével összehasonlítva. e: Az eritéma intenzitása Rrr-ként jelenik meg a CRD értékénél minden genotípus esetén. f: Immunfluoreszcens CPD-festés közvetlenül a CRD besugárzása után (zöld). Fehér, szaggatott vonal jelzi a határt a dermisz és az epidermisz között. Statisztika: “pair to pair” összevetés Mann-Whitney U-teszttel. (#p<0,05; *p<0,005; **p<0,001).

besugárzásnál. Amikor a bőr vastagodásának mértékét az OCT mérésekből számítottuk, hasonló értékeket találtunk, mint a tolómérővel történő méréseknél. A C57BL/6 egerek esetén a bőr vastagsága 1,61-szeresére növekedett (SD ± 0,19) a besugárzás hatására a nem kezelt területhez képest. A Balb/c egerek CR dózisú besugárzása estén 1,29-szeres növekedést mutattak (SD ± 0,11), míg a legszembetűnőbb vastagságbeli változást az SKH-1 egereknél észleltük, 1,63-szoros értékkel (SD ± 0,18) (5. c ábra). Eredményeink szerint tehát a bőrödéma az eritémához hasonló fontosságú marker az egér bőrének UV-sugárzásra mutatott reakciójában.

Ha a bőrreakciókat a CRD besugárzásnál elemezzük, akkor jelentős különbségeket tapasztalunk: az eritéma erősebb a Balb/c egereknél (52,85% eritéma vs 47,15% ödéma), míg a C57B/6 esetében (44,48% eritéma vs 55,52%). ödéma) és az SKH-1 genotípusú egereknél az ödéma dominálja a kialakult bőrelváltozásokat (41,98% eritéma vs 58,02%

ödéma) (5. d ábra).

5. ábra A bőr vastagsági növekedésének in vivo és ex vivo értékelése és a CRD meghatározása

A kísérleteink precízebb értékeléséhez bevezetjük a klinikailag releváns dózis (CRD) kifejezést, amely az a legalacsonyabb dózis, ahol az eritéma vagy az ödéma először látható egyszeri UVB-irradiáció után. a: In vivo a bőrödéma arányát a besugarazott és be nem sugarazott területek vastagságának mérésével határoztuk meg; Az értékek a bal oldali panelen vannak feltüntetve. A jobb oldali panelen a CRD számszerű értékei láthatók. (#p<0,05; *p<0,005; **p<0,001) b: A bőr vastagságának ex vivo értékelése optikai koherencia tomográfiával (OCT). Az egér genotípusához egy reprezentatív minta OCT-képeit mutatjuk a bal oldalon. A képeket besugárzási helyekként mutatjuk be az egereken: a képeket 40 mJ/cm² UVB után a bal felső sarokban, a maximális 150 mJ/cm² irradiáció után a jobb alsó sarokban mutatjuk, ahogy a címkék jelzik. A felső középső kép az ál-besugárzott területeket ábrázolja. A besugárzott és az UV-től védett területek közötti határokat mindegyik képen fehér nyilakkal jelöltük, kivéve a felső középső képeket, amelyek szimulált besugárzásnak voltak kitéve. A jobb oldali grafikonok az OCT képanalízis eredményeit mutatják a három egércsoportban. Az oszlopok felső része az epidermis átlagos vastagságát, az alsó rész a dermális komponensek átlagos vastagságát képviseli. c: A bőr vastagság változásának mértéke CRD-nél, az OCT elemzés objektív mérései alapján. Mind a C57BL/6, mind az SKH-1 egerek statisztikailag szignifikánsan nagyobb bőrvastagodást mutattak, mint a Balb/c egerek. d: Az oszlopok a bőrpír-viszony (4. ábra) és a bőr vastagságának (5. ábra) a bőrpír és az ödéma arányát mutatják: C57BL/6 egerek: bőrpír: 44,48% SD ± 5,37% vs ödéma: 55,52% SD ± 6,68%; Balb/c egerek:

eritéma: 52,85% SD ± 10,42% vs ödéma: 47,15% SD ± 3,84%; SKH-1 egerek: eritéma:

41,98% SD ± 4,99% vs ödéma: 58,02% SD ± 6,59%.

Statisztika: pár és pár összehasonlítás a Mann-Whitney U-teszttel (# p <0,05, * p <0,01,

** p <0,005).

6. ábra UVB-irradiált bőr hisztopatológiai és immunfluoreszcens értékelése

a: A CRD-vel besugarazott és be nem besugarazott területek hisztopatológiai képei H&E festéssel. Fekete sáv = 50 m. A fekete nyílhegyek a neutrofil granulocitákra mutatnak.

b: CRD-vel besugarazott és be nem besugarazott bőrfelületek immunfluoreszcens CD3-festése (zöld). A magokat ellenfestettük propidium-jodiddal (piros). Fehér szaggatott vonal jelöli a dermisz és az epidermisz határát. Fehér sáv = 50 um. A piros nyílfejek CD3-pozitív T-sejteket jelölnek; A bemutatott állatok CRD értékei: 40 mJ/cm² a C57BL/6 esetében, 50 mJ/cm² a Balb/c esetében és 100 mJ/cm² az SKH-1 egérnél. Ugyanazokat a mintákat használtuk H&E és IF festéshez. c: A bal oldali panel mutatja az epidermisz és a dermisz vastagságát a H&E-vel festett szakaszokon. A jobb oldali panel az epidermális hiperplázia mértékét mutatja az egyes egereknél a szimulált besugárzásnak kitett bőrhöz viszonyítva. d: Az oszlopok a gyulladásos sejtek átlagát jelzik a H&E metszeteken.