AZ ONKOFÖTÁLIS FIBRONEKTIN (EDA+FN) SZEREPÉNEK VIZSGÁLATA A KERATINOCITA NÖVEKEDÉSI FAKTOR (KGF) SZABÁLYOZÁSÁBAN
NORMÁL HUMÁN FIBROBLASZTOKBAN
Konczné Gubán Barbara1, Vas Krisztina1, Bebes Attila1, Göblös Anikó1, Kormos Bernadett1,2, Széll Márta1,2, Kemény Lajos1,2, Bata-Csörgő Zsuzsanna1,2
1. Szegedi Tudományegyetem, Bőrgyógyászati és Allergológiai Klinika, Szeged 2. MTA Dermatológiai Kutatócsoport, Szegedi Tudományegyetem, Szeged
Mivel a pikkelysömörös betegek tünetmentes dermiszében lévő fibroblasztok kórosan nagy mennyiségben termelik az onkofötális fibronektint (EDA+FN) és a keratinocita növekedési faktort (KGF), jelen vizsgálatainkban célul tűztük ki a KGF és az EDA+FN közötti lehetséges szabályozási mechanizmusok vizsgálatát.
Normál humán fibroblaszt sejteket különböző koncentrációjú exogén humán rekombináns KGF-el kezeltünk, majd 24 óra elteltével vizsgáltuk az EDA+FN gén- és fehérje szintű kifejeződését valós idejű RT-PCR, immuncitokémia és áramlásos citometria segítségével. Az EDA+FN mRNS (n=4) és fehérje (n=4) szinten is szignifikánsan emelkedett 25 ng/ml koncentrációjú KGF kezelés hatására.
Ezt követően normál humán fibroblasztokban az EDA+FN gén specifikus csendesítését végeztük el, amihez az OriGene Trilencer-27 siRNS duplexeit használtuk. Az EDA+FN gén expressziója a csendesítés hatására 90 %-os csökkenést mutatott. A hatékony transzfekciót követően 96 órával az EDA+FN mennyisége fehérje szinten 1/3-val csökkent. Az EDA+FN gén csendesített minták felülúszójában a KGF kifejeződését fehérje szinten ELISA technikával vizsgáltuk. A KGF termelés EDA+FN csendesített fibroblasztokban növekedett a kontrollhoz képest.
Eredményeink arra utalnak, hogy az irodalomban a fibroblasztokban eddig leírt FGFR receptor IIIc variánson kívül a KGF specifikus IIIb variáns is jelen van a sejtek felszínén. A receptor variánshoz kötődő exogén rekombináns KGF fokozza a sejtek EDA+FN termelését.
Az EDA+FN kifejeződés változása eredményeink szerint hatással van a sejtek KGF kibocsátására.
