TA Dki Éekezé Téziei

(1)

MTA Doktori Értekezés Tézisei

Háziállatok szöveti lipidjeinek

zsírsavösszetételi elemzése eltér® élettani

állapotokban

Dr. Szabó András (Ph.D.)

Kaposvári Egyetem

Állattudományi Kar

Kaposvár, 2013

(2)

(3)

1. Bevezetés

Azállattenyésztésitudományokterületénegyrehangsúlyosabbszerepet

kapnakbiokémiai,illetveélettaniszempontok,kétf®területenis. Atáplál-

kozástudományésazállatitermékel®állításkapsolatamáraigenszorossá

vált,hiszenajómin®ség¶termékalapjatagadhatatlanulazegészséges és

hatástanilagisismertkörülményekközötttermel®állat. Amodernállat-

tartásaszelekiómellettszámosolyankörnyezeti(pl.tehnológiai)faktort

alkalmaz,melyekgyakarankevésbéismertmódonhatnakazállatokjólé-

tére(welfare)vagyegyszer¶enazéletmin®ségére. Atáplálkozástudomány

rohamosfejl®désévelösszhangban azállati eredet¶termékekösszetétele,

különösenafunkionáliskomponensekfokozottjelenléte prioritástnyert,

melynekmár a termékel®állítás során is egyre nagyobb jelent®sége van.

Miutánahumánzsírsavellátásegyharmadát-felétazállatitermékekbiz-

tosítják,fokozottgyelemilletimegazállatitermékekzsírsavösszetételét,

különösenpedig azesszeniáliszsírsavakat. A dolgozatbafoglalt, f®képp

azállatiszövetekzsírsavösszetételére vonatkozóközelítésekközelsemte-

kinthet®kátfogónakvagyteljesnek,mégisélzottanarrairányultak,hogy

megmutassákazsírsavösszetételbizonyoskörnyezetiésgenetikaitényez®k

hatásárabekövetkez®meglep®ennagyváltozatosságát. A lehet®ségekhez

mérten nem kizárólag a zsírsavakra, hanem a zsírsav-, és esetenként a

szervezetszint¶ lipidmetabolizmus vizsgálatára is vállalkoztam,illetve a

legtöbbesetbenlipidfrakióhozismegpróbáltamkötniatapasztaltválto-

zásokat.

AKaposváriEgyetemÁllattudományiKaránakÁllatitermékMin®sít®

Laboratóriumában az állati termékekmin®ségét a lehet® legszélesebben

értelmezi a munkasoportunk. Kapsolódva a Karon folyó, els®sorban

állattartásiéstakarmányozásikezeléseketalkalmazókísérletesmunkához

a dolgozatban bemutatandó kísérletes aktivitás arra irányult, hogy f®-

képpháziállatok(eml®sök,baromfajokéshalak)szöveteibenelemezzeaz

anyagsereintenzitás,a rendkívül intenzívnövekedés, valamint a takar-

mányeredet¶zsírsavakszövetilipidekre,lipidfrakiókzsírsavairaésennek

folyományaként azoxidatív stabilitásra gyakorolt hatásait. A dolgozat-

banennekmegfelel®ena 2004-2012 id®szaktámogatottkutatásaitfogla-

lom össze, melyekgazdasági és vadon él® állatokon, kontrollált kísérle-

tek,illetveszisztematikusmintagy¶jtésekkeretébenkészültekaKEÁTK

ÁllatitermékMin®sít®Laboratóriumában.

(4)

1.1. El®zmények

Állatieredet¶lipidekreirányulókísérletesmunkámataPh.D. ösztön-

díjas id®szakban kezdtem el (kizárólag nyúlon), majd ezt követ®en in-

tézményi szint¶ támogatás mellett aKaposváriEgyetemÁllatudományi

Karán2004-benlétrejöttazakkoriÁllatiTermékfeldolgozásésMin®sítés

Tanszék. ATanszékenlehet®ségetkaptamegylipidekkelfoglalkozólabo-

ratóriumirészkialakítására,RomváriRóbertProfesszorvezetésemellett.

Ezzelegyid®benháromévesOTKAPosztdoktoripályázatitámogatásban

részesültünk háromévre (2004-2007). A laboratóriumban annak f®, el-

s®sorbanazélelmiszer alapanyagokmin®sítésére irányulóprolja mellett

azótahazai -éskisebbrészben nemzetközi-támogatással folynakrend-

szeres, az állati (eml®s, madár éshal) lipidekre irányuló kutatási prog-

ramok. Szerensésmódon,alapozvaaKEÁTKspeiális állattenyésztési

adottságaira,sikerültezenvizsgálatoklegtöbbjébeazállatkísérleteslehe-

t®ségekkelrendelkez®társ-tanszékeketéskollégákatisbevonni.

1.2. A kutatások élja

Azértekezéstárgyáhozkapsolódóvizsgálatoknégyf®soportbasorol-

hatók,ésnégyalapvet®kérdésreirányultakaélkit¶zésekis.

1. Ajelent®seneltér®energetikaiállapotok(intenzívnövekedés,ener-

giamegvonás)metabolikushatásaihogyanírhatókleszelektáltbaromfa-

jok(pulyka,brojlersirke,tojótyúk)klinikai-kémiaivizsgálatával?

2. Az energetikai status milyen hatást gyakorol a szöveti lipidfrak-

iókzsírsavösszetételére madárfajokban? (Pulykamellizomzat ontogene-

zisalattimembránlipidösszetételi elemzése,ésbaromfajokkomparatív,

allometrikusvizsgálata (szív,máj,vese,tüd®(parenhymaéssurfatant)

ésagy).

3. Anatívszövetitriglieridekösszetételénekhelyzetspeikuszsírsav-

összetételielemzésealkalmas-eafaj-ésfajtaazonosításrahételtér®fajés

kétsertésfajta esetében?

4. Milyen kinetikávaljellemezhet®a takarmányeredet¶zsírsavak szö-

vetilipidekbeéslipidfrakiókbatörtén®inkorporáiójaédesvizihalakban,

afrikaiharsaéstilápiaesetében?

(5)

2. Anyagok és módszerek

2.1. Vizsgálatba vont állatok, tartás, takarmányo-

zás

Azalábbbemutatottvizsgálatoksoránmindenesetbenmeghatároztuk

atakarmányoktáplálóanyag-,ésszükségeseténzsírsavösszetételét is,az

állatvizsgálatokpedig aMunkahelyiÁllatkísérleti Bizottságengedélyezé-

sétkövet®entörténtek.

2.1.1. Eltér® energetikai állapotok metabolikus hatásainak jel-

lemzésebaromfajok klinikai-kémiai vizsgálatával

2.1.1.1. Tojótyúk mesterséges vedletése,a koplalás vérparamé-

terekkeltörtén® nyomonkövetése

Tojótyúkokon12napos,teljestakarmánymegvonásosmesterségesved-

letéstalkalmaztunk,melyperiódusbanháromnapontavérvételeketvégez-

tünk,klinikai-kémiaiszérumanalíziséljából. Ugyanezenmadarakszöve-

teitelemeztüka2.1.2.1. fejezetben.

2.1.1.2. Hústermelésre szelektált pulykavérbiokémiai paramé-

tereineknyomonkövetése,akelést®la vágásig

BUT Big 8 hímivarú, nagy növekedési erély¶pulykákat neveltünk az

intenzívnövekedés nyomon követése éljából, majd 3naposan, 4,8, 12,

16,illetve20heteskorbanvégeztünkvérvételeket,klinikai-kémiaiszérum

analízis éljából. Ugyanezen állomány izommintáit elemeztük a 2.1.2.2.

(illetve3.1.2.2.) fejezetben.

2.1.1.3. Abrojlersirkekliniko-kémiaivizsgálata(follow-up)

ateljesfelnevelés alatt

Avizsgálatba Ross 308hímivarúbrojlereketvontunk be, avérvétele-

ket0,1, 2, 3,4 és5hetesen végeztük,az intenzívnövekedés jellemzése

érdekében.

2.1.2. Az energetikai status hatása a szöveti lipidfrakiók zsír-

savösszetételére madárfajokban

2.1.2.1. Tojótyúkokmesterségesvedletése,adrasztikusenergia-

megvonáshatásaamájésszíveltér®lipidfrakióinak(triglierid

ésfoszfolipid)összetételére

Avizsgálatbana2.1.1.1. fejezetbenismertetettmadarakvettekrészt.

Akoplaltatásid®szakátmegel®z®en,ésannakvégén(0. és12. napok)10-

10madárbólaszívetésamájatzsírsavösszetételi(foszfolipidéstriglierid

frakiók)analízisreeltettük.

2.1.2.2. Pulykamellizommembránlipidekontogenezisalattivál-

tozásainakleírása

A2.1.1.2. fejezetbenismertetettállománybólpróbavágástkövet®enfel-

színesésmélymellizommintákatelemeztünkmindenmintavételiid®pont-

(6)

ban,a membránlipidekzsírsavproljára vonatkozóan, allometrikusadat-

értékeléssel.

2.1.2.3. Eltér® kifejlett kori testsúlyú madárfajok szívizmának

membránlipidjei,allometrikusanalízis

Azelemzésbe pulyka,lúd,tyúk,fáán, húsgalamb,balkánigerleésja-

pánfürjfajok 5-5 kifejlett egyedét vontukbe,ésaszívizom teljesfoszfo-

lipidjeinekzsírsavproljátelemeztük,allometrikusmódszertannal,atest-

súlyfügg®szabályosságokfeltárásaérdekében.

2.1.2.4. Eltér® kifejlett kori testsúlyú madárfajok tüd®, vese,

májésagyfoszfolipid zsírsavproljának allometrikus elemzése

A 2.1.2.3. fejezetben megadott fajokon túl foglyot is vizsgáltunk. A

tüd®, vese, máj ésagy mintákteljes foszfolipid zsírsavösszetételét hatá-

roztukmeg,azadatértékelés szinténallometrikusvolt.

2.1.2.5. A tüd® parenhymalis és surfatant foszfolipidjeinek

allometrikus elemzésebaromfajokban

A2.1.2.4. fejezetbenemlítettfajokbantüd®b®lmosottsurfatant(vala-

mintateljestüd®ésamosottszövet,kváziparenhyma)foszfolipidjeinek

zsírsavprolját határoztuk meg, allometrikus adatelemzésre alapozva, a

strukturális és a szekretált foszfolipid zsírsavprol testsúlyfügg® szabá-

lyosságainakvizsgálataéljából.

2.1.3. A szöveti triglieridek (TG) összetételének natív alaku-

lása;afaj-ésfajtaazonosításlehet®ségei aTG molekulaszerke-

zetrészletesanalízisére alapozva (regiospeikus analízis)

2.1.3.1. Afajspeikustulajdonságokelemzésetriglieridekmo-

lekulaszerkezetivizsgálatára alapozva

Gímszarvas,jávorszarvas,vaddisznó,extenzívennevelthússertés,borz,

húsnyúléslúdsubutanzsírmintáikerültekelemzésre. Atriglieridekb®l

hasnyállipázos hidrolízistkövet®enaz1,3 ésa2helyzetizsírsavproltis

meghatároztuk,azalábbiakszerint: 1,3helyzetzsírsavprolja,zsírsavan-

ként: 1,3%=(3xTG%-2MG%)/2,majddeniáltukazún. helyzetimeg-

oszlásifaktort: Helyzetimegoszlásifaktor(HMF):HMF=log(1,3%/2%).

2.1.3.2. Afajtaszint¶eltérésekvizsgálatasertésgenotípusoktri-

glieridjeinekmolekulaszerkezetivizsgálatával

A 2.1.3.1. fejezet módszertanára építve a fajtaszint¶ eltérések felde-

rítése volt a él, magyar nagyfehér és sz®ke mangalia egyedek szöveti

triglieridjeiben(szív-ésvázizom,hátszalonna,tüd®,vese,májéslép).

2.1.4. A takarmányeredet¶ zsírsavak szövetilipidekbe és lipid-

frakiókba történ® beépülésének (inkorporáió) vizsgálata, ha-

lakban

2.1.4.1. Afrikaiharsa(Clariasgariepinus)lézsírsavösszetétele

éshúsmin®sége,növényiolajok etetésétkövet®en

Avizsgálatéljaazvolt,hogymegállapítsuk,ahalolajrészlegeshelyette-

sítése(növényiolajokkal)aharsatakarmánybanmilyenváltozásokatidéz

(7)

el®ahúsmin®ségben,ahúskémiaiösszetételében,illetvehogyjellemezzük

azsírsavakizomszövetbe (annakteljeslipidtartalmába) történ®inkorpo-

ráióskinetikáját, azún. zsírsavkihígulási modellsegítségével, hathetes

kezelésiintervallumban,hárommintavételrealapozva.

2.1.4.2. Növényiolajokszövetilipidfrakiókbavalóbeépülésének

elemzéseNílusi tilápia (Oreohromis nilotius)szerveiben

A vizsgálat élja az volt, hogy jellemezzük eltér® növényi olajok és

halolaj(mintkontroll)zsírsavainakinkorporáiósüteméttilápiaszövetek

(lé,has¶rizsír,májésgonádok)lipidfrakióiba(triglieridekésfoszfolipi-

dek),hatheteskezelési periódusban. Azadatelemzéstazegyszer¶zsírsav

kihígulásimodellsegítségévelvégeztük.

2.2. Mintael®készítés és laboratóriumi vizsgálatok

A vérmintákból a klinikai-kémiai paramétereket automata készüléke-

kenhatározták meg. A szöveti lipidtartalom kivonása (tejesszövetb®l,

tüd®mosófolyadékból) mindenesetben Folh ésmtsai (J. Biol. Chem.,

1957, 226:497-509) módszeréveltörtént, antioxidánsjelenlétében,míg a

komplexlipidek frakionálása szilikagéloszlopon(emelked®polaritású e-

luenssorozatokkal),illetve szilikagélG60 lemezekentörtént. Azsírsavak

gázkromatográás elválasztását és elemzését megel®z® származékképzés

minden pontban NaOCH

3

alapú, báziskatalizált módszer volt. A lipi-

dekkelkapsolatospreparatívlépések aKE ÁTK ÁllatitermékMin®sít®

Laboratóriumában történtek,míg gázkromatográás analízis azÁllatte-

nyésztésiésTakarmányozásiKutatóintézetbenkészült(egytanulmány,a

harsalé(2.1.4.1.) kivételével),Shimadzu2010 készüléken. A malondi-

aldehid(MDA)konentráiótnatív, -70 o

C-ontároltszövetekb®laSzIE

MKK Takarmányozástani Tanszékén határoztákmeg, fotometriás mód-

szerrel, míg a hagyományos húsmin®ségre irányuló vizsgálatokat a KE

ÁllatitermékMin®sít® Laboratóriumában végeztük. A Weendeianalízis

soránszabvány módszereketkövettünkafelsoroltakszerint: szárazanyag

(MSZ-08-1783-1: 1983); nyersfehérje, Nalapon, Kjeldahl módszer (MSZ

6367-11:1984);nyerszsír(6830-6:1984);nyershamu(MSZISO5984).

2.3. Statisztikai értékelés

Azsírsavprolalapadatok értékelésesoránsoportonként,illetvekeze-

lésenként a kétszeres szórástávolságon kívül es® adatokat (els®dleges és

származtatott esetekben is) kihagytam az elemzésb®l. A vérparaméte-

rekid®pontonkéntiösszehasonlítása sorántöbbtényez®svarianiaanalízist

(kezelésid®tartama,testsúly)alkalmaztam,Tukey-féleposthoteszttel.

Azenergiamegvonáshatásánakelemzésekorakezd®észáróid®pontokban

(8)

felvettadatok(zsírsav,malondialdehid)összevetésérekétmintásfüggetlen

t-próbátalkalmaztam. Azallometrikuselemzéseksorán(3.1.2.2.-3.1.2.5.)

azsírsavprolprimerésszármaztatottadataitmintatestsúlyx-edikhat-

ványaithatároztammeg(zsírsavmol%=konstans+testsúly x

).

A2.1.4. fejezetbenalkalmazottpredikiós modellsorán Jobling (Aqu-

ault. Res., 2004, 35:706-709) ún. zsírsav kihígulási modelljét vettem

alapul. Amodell szerintazsírsavak inkorporáiója legtöbbszöraszerve-

zetbenfellelhet®készletkihígulásávaljellemezhet®folyamat,ennélfogva

azviszonylagegyszer¶modellelleírható,azalábbiakszerint:

Pt= Pr+ (Pi Pr) /(Qt -Qi),ahol

Pt: tid®pontbanazadottzsírsav%-a

Pi: akiindulásiid®pontbanmértzsírsav arány

Pr: arefereniasoportzsírsav-részaránya

Qi: kvantitatívmutató(pl. szervtömeg)akiinduláskor

Qt: éstid®pontban

AstatisztikaielemzésekbenmindenesetbenSPSS10forWindows(1999)

programothasználtam,azábrázolást pedigazallometrikusmodellekese-

tébenQtiPlot0.9.7.6. (2009)szoftverrelkészítettem,egyLinuxmunkaál-

lomáson.

(9)

3. Eredmények és értékelésük

3.1.1. Eltér® energetikai állapotok metabolikus hatásainak jel-

lemzésebaromfajok klinikai-kémiai vizsgálatával

Teljestakarmánymegvonásosmesterségesvedletésnekkitetttojótyúkok

klinikai-kémiai analízisére alapozva megállapítottuk, hogy az általános

energiahiányeseténatojástermelésiiklusgyorsanmegszakad,amitavér-

benlegérzékenyebben a szérum metabolitok (sökken® triglierid, emel-

ked®HDL ésösszkoleszterin) jeleznek. A máj és szívizom esetében ta-

pasztalt, kés®bbiekben(3.1.2.1.) bemutatásrakerül®jelent®skárosodás,

illetvekatabolizmusazintraellulárisenzimekszérumbanmértaktivitásá-

naknövekedésébensaka

γ

^-GT^és^a^LDH^esetében^t¶nt^reálisnak. ^Fontos

megjegyezni,hogyafentiekbenbemutatottvizsgálatindirektéljaazvolt,

hogyateljestakarmánymegvonásosvedletésimódszerekkelkapsolatosan

olyan, refereniaként is értelmezhet®eredményekettegyenközzé, melyek

alapjánannakháttérbeszorulása voltvárható. Id®közbenezenvedletési

módszermárbetiltásrakerültHazánkbanis.

Azegyirányúan hústermelésre szelektált madaraknál nagyon gyakran

fordulnak el® miopátiás esetek; elemzésünk kimondottan ezen esetleges

kórkép,vagya nagyonintenzívizom hipertróaokozta jelenségekre irá-

nyult. Anagynövekedésierély¶hústípusúpulykákszérumelemzéseolyan,

koránér® madársajátosságaira utalt, melynéljellemz®a korai, szikfel-

használásból fakadó triglierid sús,majd azigen intenzívizomfejl®dés

(magas laktát dehidrogenáz; extrém magas és tovább emelked®szérum

kreatinkinázaktivitás,1. ábra),ésvégüligen nagykifejlettkoritestmé-

retetérel. Érdekestapasztalat,hogyapetoralis izomzatlineárisnöveke-

dését(mellizomsúly=0.2787testsúly123.67;R 2

=0.9935,P<0.001)

er®sALP aktivitás-sökkenés kísérte(2. ábra),mely asontrendszer és

azizomzataszinkronfejl®déséreutaltebbenaszéls®ségesenszelektáltál-

lományban.

(10)

1. és2. ábraAkreatinkináz(CK)ésazalkalikusfoszfatáz(ALP)

aktivitásváltozásaahústípusúpulykafelnevelésesorán

Bárazalkalmazottmetodikaésközelítésrutinanalízisenalapul,asze-

lekióel®rehaladtávalahústermel®állományok folyamatosantávolodnak

akiindulásiponttól(bronzpulyka),ígyeredményeink,különösenaszelek-

ióhátrányoskövetkezményeikapsánújszer¶nektekinthet®k.

3.1.1.3. Abrojlersirkekliniko-kémiaivizsgálata(follow-up)

ateljesfelnevelés alatt

Amindösszesenöthétigtartónövekedésifolyamatsorán(2800gél®tömeg

eléréséig)egyjellegzetesenkoraiéréstmutató(koraitriglieridésösszko-

leszterinkonentráiósúsokésgyorsanemelked®konentráiójúplazma

fehérjék)madáradatait rögzítettük. A hústermelésreirányulószelekió

olyan mérték¶ izom hipertróát eredményezett a vizsgált Ross 308 ge-

notípusban, mely enyhe hiperkalémiához, magas AST és hasonlóan a

hústermel®pulykához-extrémmagasCKaktivitáshozvezetett(3. ábra).

3. ábraAkreatinkinázaktivitás-emelkedésea

brojlersirkékfelnevelésesorán

Érdekesmódon a nagyonrövid nevelési id®szak nemtette lehet®vé a

korhatásánakhagyományosértékelését(szervetlenfoszfátésNaminimális

(11)

uktuáiója),ámmindajellegzeteskoraérés,mindpedigazextrémmagas

hústermelésikapaitásjólkimutathatóvoltezenszelektáltállománybanis.

Atojótyúkok ipariszint¶ tojástermeléserendszerint nemsakegy, ha-

nemtöbb iklusban valósul meg, melyekethagyományosan mesterséges

vedletésiprogramokszakítanakmeg. Tekintettelarra, hogyavedlésifo-

lyamat megindítása priméren az energiaraktárak kimerülésének köszön-

het®,lipidanyagsereszempontjábólkiemelked®en érdekesezen élettani

helyzet,melyetjelenfejezetbenamájésaszívtriglierid(TG)ésfoszfo-

lipid(PL)zsírsavanyagseréjénekelemzésénkeresztüljellemeztünk.

Amájtriglieridekbenakoplaláshatásáraapentadekánsav(C15:0),

agondoénsav(C20:1n9)ésanervonsav(C24:1n9)részarányaemelkedett,

míg a palmitinsav (C16:0) aránya és az n6/n3 hányados er®sen lesök-

kent. Fontos megjegyezni,hogy aC20< PUFA el®állításának legjellem-

z®bbhelyeamáj,melyakoplalásidejénazextrahepatikusszervekPUFA

ellátásábanszintekizárólagosszerep¶,miutánaraktározott,adiposaere-

det¶triglieridezenzsírsavakbanmeglehet®senszegény.Érdekes,bizonyos

mértékigellentmondvaafentieknekmindazarahidonsav,mindpedig a

dokozahexaénsav határozott retenióját (paradoxial onservation) ta-

pasztaltukamájtriglieridekben.

Amáj foszfolipidjeinekenergiamegvonásraadott reakióiközül ki-

emelend® apalmitinsav, a palmitoleinsav (C16:1n7), az olajsav (C18:1

n9),a dokozahexaénsav (C22:6 n3)ésaz összes n3 zsírsav aránysökke-

nése,azt tükrözve, hogyahosszan tartóenergiahiány meghatározómér-

tékbenbefolyásolja amáj membránlipidjeinekösszetételét. Afoszfolipid

zsírsavprolt tekintveúgyt¶nt, hogyamája normál, élettani memb-

ránlipidintegritástnem képes12 napos koplalás alatt fenntartani, és a

jelent®sszervsúlyveszteség(24%)mellettkomolyabbmembránkárosodás-

salisszámolnikell(melyavérparaméterekbenisigazolhatóvolt,3.1.1.1.

fejezet).

A miokardiális triglieridekben, melyeksak igen sekély válasz-

reakiót mutattak, az

α

-linolénsav aránya sökkent, míg a

γ

-linolénsav részaránya szignikánsan emelkedett a 12 napos kezelés következtében,

azt jelezve, hogy az éhezési állapot bár megemeli a szívizom triglierid

konentráióját(+12%),annakmin®ségitulajdonságaitsakminimálisan

befolyásolja.

Aszívmembránlipidjeibenalegfontosabbváltozáskéntértékelhet®,

hogyazeikozadiénsav,azeikozatriénsav(C20:3n6)ésadokozahexaénsav

(12)

részarányokszignikánssökkenéstmutattak,mígaC20:4n6/C20:3n6

hányadoskéntmegadott

Δ

⁵^deszaturáz^index^értéke^jelent®senemelkedett, arrautalva,hogyadrasztikusenergiamegvonástojótyúkbanamiokardi-

álismembránlipidekdegradáiójávaljár,melyafoszfolipidekzsírsavainak

homeosztázisát negatívanbefolyásolja.

A lipidperoxidáió mértékének beslésére alkalmazott malondialde-

hidkonentráiója amájban igener®senmegemelkedetta12. napra(4.

ábra),melynekháttereamagasPUFArészaránnyalrendelkez®strukturá-

lislipidekdegradáiójalehetett,miutánaMDAf®legaháromvagytöbb

telítetlenkötésttartalmazózsírsavakbólkeletkezik.

4. ábraAmájésaszívizomlipideperoxidáiójánakváltozása

mesterségesvedletéssorán

Azeredményeketösszefoglalvaazttapasztaltuk,hogyavedletésiprog-

ramamájban mindatároló, mindastrukturálislipidekbenmennyiségi

ésmin®ségiváltozásokatisel®idéz. Úgyt¶nik,12naposteljestakarmány-

megvonáskomolyabbmájsejtmembránkárosodástokozott,melyetafoko-

zottlipidperoxidáióis jelzett. Mígamáj triglieridekkiemeltszerepet

játszottak a polién zsírsavak homeosztázisának fenntartásában, addig a

szívtriglieridekszintesemmilyenmin®ségi változástnemmutattak. A

szívtriglieridekmennyiségi növekedése, ésváltozatlanzsírsavösszetétele

kapsán amáj speiális kardioprotektívszerepe merültfel a koplaltatás

idején.

A hústermelésre szelektált madarakközül napjainkra talána pulyká-

ban történt a legnagyobb változás atestösszetétel ésa növekedési ütem

vonatkozásában. A pulykamellizommára korai,kelést követ® id®szak-

ban igen fontos szerepet kap, különösen a termogenezisben, míg annak

ontogenikus fejl®désével kapsolatosan meghatározó informáió, hogy a

tyúkalakúak(Galliformes) jellemz®enkoraérés¶,fészekhagyó fejl®désme-

netetmutatnak,melysorán azembrionális ésakifejlettkori energetikai

(13)

tulajdonságok jelent®sen eltérnek. A mellizom membránlipidek ontoge-

nezis alatti összetételi változásait allometrikus módszertannal elemezve

számosesetben szignikánsallometrikus felj®désmenetetírtunk le,külö-

nösena prekurzor-termékzsírsavak (C18:3n3 -C22:6 n3) reláiójában.

Azontogenezis alatt rögzített eredményekeltértek akora- éskés®nér®,

kis- és nagy test¶ madarak összevetéséb®l nyert logenetikus összefüg-

gésekt®l,amennyibenemelked®testsúlymellettallometrikusanemelked®

telítetlenségi indexet (UI) éssökken® telített zsírsav aránytigazoltunk

(5. ábra).

5. ábraAtelítettzsírsavakésatelítetlenségiindex(UI)változásaia

pulykamellizomfoszfolipidjeiben,atestsúlytólfügg®en

Afentieredményekalapjánindokoltnakt¶nikakérdés,hogyvajonsak

ahústípusúpulykamembránlipidösszetételénekalakulásailyenspeiális,

vagymaga azontogenezis alattifejl®dési menettérelnagymértékbena

logenetikusösszefüggésekt®l.

membránlipidjei,allometrikus analízis

Azalapvet®enkomparatívvizsgálatkeretébeneltér®kifejlettkoritest-

súlyúmadarakszívizmánakmembránlipidjeitelemeztük,mígamunkahi-

potézisalapja az volt, hogy amembránok, mintmetabolikusütemadók

elméletetmadarak esetében sak mellizomban és szub-elluláris szinten

(máj mitokondriális membránokban és vese mikroszómában) igazolták.

A madárszívizom membránlipidzsírsavösszetételi eredmények szerint a

vizsgálatbavont fajok közöttjelent®sebb interspeikus eltérésekállnak

fenn. A származtatott zsírsav adatok közül a telítetlenségi index (UI)

ésaz összesPUFAarányaallometrikussökkenéstmutatott,míg utóbbi

zsírsav soportban anagyobb test¶madarak alasonyabb n3részarányt

(14)

mutattak,az összes monoén ésösszes n9monoénzsírsav pedig allomet-

rikusemelkedést. Azegyedizsírsavak közülapalmitoleinsav, azolajsav,

avakénsav, agondoénsav ésaz eikozatriénsav (C20:3 n3) allometrikus

arányemelkedéstmutatott,mígapalmitinsav,asztearinsav,adokozapen-

taénsav(C22:5 n3)ésa dokozahexaénsav aránya (6. ábra) allometrikus

aránysökkenésselvoltjellemezhet®. Aszívizommalondialdehidkonent-

ráiójanegatívallometrikusösszefüggéstmutatott(7. ábra).

6. és7. ábraAdokozapentaén-ésdokozahexaénsavrészarányának,

valamintamalondialdehidkonentráiójánakallometrikusváltozásai

madárszívizomban

Amadárszívmembránlipidekzsírsavproljábantapasztalttestsúlyfügg®

szabályosságok alapvet® egyezést mutattak a madármellizom és eml®s

szívizomesetében eddig korábban publikált adatokkal. Ismert, hogy az

alapanyagsere intenzitása allometrikus változást mutat, melyetf®leg a

sejtmembránok,azokonbelül pedig leginkább alipidek szabályoznak. A

korrelatív,testsúlyfügg®membránlipidösszetételiszabályosságok,különö-

senatöbbszöröstelítetlenségmértékeésDHArészaránya,azazamemb-

ránlipid mili® er®sen befolyásolja a membránhoz kötött enzimek, f®leg

a Na +

/K +

ATPáz molekuláris aktivitását. Bemutatott eredményeink

arrautalnak,hogyaszívizombanisigazoltzsírsavösszetételi szabályossá-

gokegyszélesebbösszefüggésrészeikéntértelmezhet®k,melyekmadárban

nemsak avázizomzatban, de a szívben, valamint a vese mikroszómális

membránesetébenisfennállnak. Aszívizombantapasztalteredményekre

alapozvaatovábbiakbanamadaraktöbb,metabolikusanaktívszervéreis

kiterjesztettükavizsgálatot, arrakeresveaválaszt,mennyireáltalános a

(15)

madárszervekbenamembránlipidekzsírsavainakallometrikuselrendez®-

dése.

Hasonlóan a 3.1.2.3. fejezetben bemutatott, fajok összehasonlítására

alapozottvizsgálathoz,jelenfejezetbennyolmadárfajeddignemelemzett

szerveinekmembránlipidzsírsavproljátelemeztük. Amunkaújszer¶sége

abbanállt,hogya mellizomésszívizommellett többtovábbi, metaboli-

kusanaktívszerv (teljestüd®, máj, veseésagy)teljes szövetifoszfolipid

tartalmánakanalízisérekerültsor. Eredményeinkszerintavese,amájésa

tüd®foszfolipidzsírsavproljánakallometrikusösszefüggéseinagybanha-

sonlítottakakorábbanváz-ésszívizomban,valamintszub-ellulárisfrak-

iókbanisigazoltszabályosságokhoz (testsúllyalemelked®egyszerestelí-

tetlenség,közelállandótöbbszöröstelítetlenség,kompetitívn3-n6zsírsav

arányokésnagyoner®snegatívallometrikusösszefüggéstmutatódokoza-

hexaénsavarány(8. ábra)). Érdekesésfontostény,hogyezenösszetételi

sajátosságokatmégaPLzsírsavprolraszignikánshatástgyakorlótakar-

mányeredet¶zsírsavaksemfedtékel. Ennekmegfelel®enmegállapítható,

hogyazagy kivételévelalegtöbb,metabolikusanaktívszervbenjólnyo-

mon követhet® a membránok, mint ütemadókelv biokémiai szabályozó

szerepe.

8. és9. ábraAdokozahexaénsav(DHA)ésamalondialdehid(MDA)

allometrikusváltozásaiavizsgáltnyolmadárfajvese,máj,tüd®ésagyi

foszfolipidjeiben

AMDAtestsúlyfügg®konentráióváltozása (9. ábra)avesében,máj-

banéstüd®benarrautal,hogyamembránlipidektelítetlenségeperoxidá-

(16)

ióvalszembenérzékennyétesziezen szerveklipidjeit, melybenkulssze-

repetkapadokozahexaénsav.

3.1.2.5. Eltér® kifejlett kori testsúllyal rendelkez® madárfajok

tüd®parenhymaéssurfatantelemzése,allometrikus módszer-

tannal

Amadárlégz®szervrendszerénvégzettvizsgálatkérdésfelvetésea3.1.2.4.

fejezetben egy részleteiben nemvizsgált ponthoz kapsolódott, melyben

ateljes madártüd®összes foszfolipidjének zsírsavproljában amembrá-

nok, mint az anyagsere ütemadói elmélet igazolhatónak bizonyult. A

madártüd®azonban foszfolipidekben igen gazdag (a. 80%)surfatan-

totis tartalmaz (illetve szekretál), melynek a teljes PL zsírsavprolhoz

való hozzájárulása afentivizsgálatban ismeretlenmaradt. Jelen munka

élkit¶zéseazvolt,hogyelemezzeamadársurfatantPLzsírsavproljá-

banesetlegesentestsúly-függést(áttételesenpedig alapanyasere intenzi-

tás)mutatózsírsavakat,valamintkülönfelmérjeasurfatantmentestüd®

parenhymaszerepétateljestüd®rekapottallometrikusösszefüggésekki-

alakításában. F®bb eredményeinkszerint a madár teljes tüd®szöveti és

tüd®parenhymálisfoszfolipidjeihatározottannegatívallometrikusössze-

függést mutatnakaDHAvonatkozásban, viszonylagkiegyenlítettpolién

zsírsavszintmellett,amembránok,mintazanyagsereütemadóielmélet-

nekmegfelel®en. Kisebbmeredekséggelugyan,deasurfatantPLfraki-

ójában(mintszekretált,ésnemstrukturálisfoszfolipidben)isigazoltuka

DHAnegatívallometrikusösszefüggését (10. ábra).

10. és11. ábraAdokozahexaénsav(DHA)arányánakésa

malondialdehid(MDA)konentráiójánakallometrikusváltozásai

madarakteljestüd®szövetében,tüd®parenhymájában,illetvea

surfatantfoszfolipidjeiben

(17)

A szöveti malondialdehid konentráiót a natív ésa mosott tüd®szö-

vetb®lhatároztukmeg,ésmindkétesetbener®sennegatívtestsúlyfüggést

igazoltunk(11. ábra). AzegyediMDAésDHAadatokközöttikorreláió

közepesnek,illetveszorosnakbizonyultakétszövettípusesetében(0,39és

0,679anatívésamosottmintákban,rendre).

Eredményeinkszerintamadárlégz®szervrendszerében(mindatüd®pa-

renhymában,mindpedigasurfatantban)adokozahexaénsavkiemelten

fontosszabályozószereppelrendelkezikmintmembránlipidkomponensés

mintasurfatant szekréiómértékétbefolyásolófaktor. ADHArészará-

nyaésanemenzimatikus lipidperoxidáió szoros korrelatívösszefüggése

arrautal,hogyamembránlipidektöbbszöröstelítetlensége,különösenpe-

digaDHAarányajelent®senbefolyásoljaaperoxidáiómértékétamadár

pulmonárisfoszfolipidjeiben.

3.1.3. A szöveti triglieridek összetételének natív alakulása; a

faj-ésfajtaazonosításlehet®ségeiaTGmolekulaszerkezetrész-

letesanalízisére alapozva (regiospeikus analízis)

3.1.3.1. A fajspeikus tulajdonságok elemzése, triglieridek

molekulaszerkezeti vizsgálatáraalapozva

Napjainkban egyre nagyobb és fontosabb feladat az állati termékek

eredetének igazolása. A szöveti lipidek élelmiszertermékek szintjén már

kevéssé alkalmasak az eredet igazolására, miután az adiposasejtek DNS

tartalmaalasony,másrészt azok leginkább olvasztott állapotbantartal-

mazzákaz állati zsírokat. Tudvalev® az is, hogy a takarmány hatása a

neutrálislipidekösszetételérenagyonmarkáns(3.1.4. fejezet), ígyameg-

bízhatófaj-vagyfajta azonosításlegtöbbszörnemlehetséges. Jelenvizs-

gálatmunkahipotéziseazvolt,hogyafajiszint¶különbségeketaTGmo-

lekulaszerkezetbenrészleteibenfeltárjuk,majdazeredményekalapjánfaj

elkülönítési lehet®ségeket vizsgáljuk, hét állatfaj (házisertés, vaddisznó,

borz,nyúl,lúd,gím-ésjávorszarvas)mintáiraalapozva. Amódszertana

triglieridekrészleges hidrolízisén ésazsírsavak helyzetspeikus (1,3és

2)összetételielemzésénalapult.

Megállapítottuk, hogyfajtól függetlenül, deasertéskivételévela 2-es

helyzetbenazsírsavaklánhosszameghaladjaaTG-ek(ésaz1,3helyzet)

savainaklánhosszát. Asertések,atöbbifajtóleltér®ena2-eshelyzetben

magasabbtelítetlenségetmutattak,minta triglierid molekula1,3 pozí-

iójában. Érdekesmódon avadésháziasítottsertés genotípusokTGés

2MGzsírsavproljanemtérteljelent®sebben. ATGmolekulaszerkezeti

vizsgálatávaligazoltukaztatapasztalatimeggyelést,hogyazonosszén-

lánhosszúságú éstelítetlenség¶,de szimmetrikusésaszimmetrikuszsír-

savak közül el®bbiekpreferáltanatriglierid 2-espozíiójában aileznek

(12. ábra).

(18)

12. ábraAzonoslánhosszúságúéstelítetlenség¶,szimmetrikus(C18:1

n9)ésaszimmetrikus(C18:1n11)zsírsavakglierinailezési

prefereniája,fajonként

A kidolgozott módszertan kis mintaigény¶ (a. 50 mg TG, melyb®l

anatív ésahidrolizált forma iselemezhet®), viszonylag jól ismételhet®,

ésjól kivitelezhet® mindenmagas zsírtartalmúszövetmintán,vagy akár

olvasztott zsírokonis. A módszer limitáiójaként említhet® annaknagy

manuálismunkaigényeésrelatívmagaslaborköltsége(extrakió,hidrolízis,

vékonyrétegkromatográaésmintánkéntkétgázkromatográásanalízis).

Amódszermegbízhatóságát ésfelbontását atovábbiakbanmárnem

fajok,hanemeltér®fajtákelkülönítésénteszteltük(3.1.3.2.). Agyakorlat-

bannagyonsokszormerülfelugyanisazakérdés,hogyahungarikumként

számontartott mangalia mintákvagytermékek(különösenzsíréshús)

elkülöníthet®k-eahússertésekmintáitól.

Irodalmiéssaját(3.1.3.1.) adatokalapjánisismert,hogyazsírsavakel-

rendez®déseaTGmolekulánbelülnemrandom. AsertésTG-ekspeiális

zsírsav-megoszlására, nevezetesen a entrálisan igen gyakori palmitinsav

el®fordulásra Hildith és Stainsby (Biohem. J., 1935, 29: 90-99) már

igenkoránutalásttettek. Vizsgálatunkéljanemsakazvolt,hogyazed-

digiekbenkevésséismertszervek(szív-ésvázizom,hátszalonna,tüd®,vese,

májéslép)esetébenjellemezzükaTGés2-monoglierid(2MG)zsírsav-

prolt,hanemhogyesetlegesfajta-elkülönítést(mangaliaéshússertés)is

lehet®vétegyünk. Azeredményekhatszervbenmindazsírsavprol,mind

(19)

pedigazegyeszsírsavakhelyzetielrendez®désetekintetébenakétfajtában

meglehet®senhasonlókvoltak,amájkivételével,aholapalmitinsavnagy

entrálisel®fordulásigyakoriságanemvoltigazolható.

A sertés fajták TG-jeinek és 2MG-jeinek direkt analízisére alapozva

igazoltukamájbanéstovábbihatszervben,hogyajellegzetessertésTG

mintázatamájatkövet®enalakulki. Afajtákközöttieltérésekminimáli-

sakvoltak,els®sorbanazsírszövetbentaláltunkmegbízhatóelkülönítésre

alapotadókülönbséget,amennyibenapalmitinsavteljesmennyiségeman-

galiábana2-eshelyzetbenfordult el®,míghússertésbensakvalamivel

alasonyabb2-eshelyzetigyakoriságotigazoltunk(a. 90%). AHMFésa

regiospeikus analízis, úgyt¶nik,fajok szintjéig nyújtlehet®séget meg-

bízhatókülönbségtételre, amódszer felbontása afajtákközötti eltérések

megállapítására már kevésbé volt alkalmas (amennyiben léteznekfajták

közöttieltérések),mégkéttávoli fajta esetébenis.

3.1.4. A takarmányeredet¶ zsírsavak szövetilipidekbe és lipid-

lakban

3.1.4.1. Afrikaiharsa(Clariasgariepinus)lézsírsavösszetétele

éshúsmin®sége,növényiolajok etetésétkövet®en

Atakarmány-,illetvetáplálékeredet¶zsírsavakközülkülönösenatöbb-

szörösentelítetlenn3soportnaktulajdoníthatókedvez®táplálkozás-élet-

tanihatás. A humántáplálkozássorán felvettn3zsírsavakjelent®srésze

(els®sorbanahosszabbszénlánalrendelkez®k)halhúsbólvagyhaltermé-

kekb®l származik. A haltakarmányozásban felhasznált zsírsavak napja-

inkradönt®ennemhal,hanemnövényieredet¶ek,melyekhatékonyságaa

halhúsel®állításbanmégnemteljesmértékbenismert.Vizsgálatunkbana

halolajmellettaszója-éslenolajafrikaiharsalébe(annakteljesszöveti

zsírsavproljába)történ®beépülésiütemét, valamintazeltér®olajok lé

min®ségregyakorolthatásaitelemeztük.

Megállapítottuk, hogy a halolaj részleges kiváltása (partial replae-

ment)növényiolajokkalnembefolyásoltahátrányosanaz afrikaiharsa

növekedési ütemét, míg a relatív magas n3 zsírsavbevitel fokozta a lé

spontán (sepegési veszteség) és indukált (felengedtetési veszteség) víz-

vesztésihajlamát. Azn3zsírsavak metabolizmusábanmégaszokatlanul

magasn3 prekurzorbevitelsem eredményezett fokozott hosszúlánú n3

zsírsavszintetikusaktivitástafrikaiharsában. Alézsírsaveredmények

elemzéséreazún. zsírsavkihígulásimodellt(2.3. fejezet)alkalmaztuk,a

beslésta3.hetiadatokravonatkozóan,a6. hetiadatsormintreferenia

felhasználásávalvégeztük. Mindanövényiolajok,mindpedigakontroll-

kéntalkalmazotthalolajf®bbzsírsavainakléösszlipidjeibetörtén®inkor-

poráiója(melyigen hatékonyvolt)márigenrövidid®-intervallumbanis

relatívjóljellemezhet®nekbizonyultazegyszer¶zsírsavkihígulásimodell

(20)

alkalmazásával. Eredményeinkels®sorbana befejez®takarmányozásésa

halhúszsírsavproljánakoptimálismérték¶módosításakapsánlehetnek

hasznosíthatókagyakorlatban.

3.1.4.2. Növényiolajokszövetilipidfrakiókbavalóbeépülésének

elemzéseNílusitilápia (Oreohromis nilotius)szerveiben

A3.1.4.1. fejezetbenbemutatottadatállományhalhúsraésösszlipidekre

vonatkozóan mintegyigazolta,hogyatakarmányváltássorán megváltozó

lipidösszetétel azsírsavak szintjén a szöveti pool kihígulásához vezet.

Azelemzésugyanakkortöbbelhanyagolássalisjárt: nemelemeztekülön

a legf®bb lipidfrakiókat (triglieridek ésfoszfolipidek), valamint a nem

mindenesetbenmagaszsírtartalmúléreirányult. Atovábbiakbanade-

pózsír,amáj,aléésagonádokelemzésétvégeztükel,lipidfrakiónként,

ésafentinéltöbbször mintázott(4mintavételiid®pont)etetési periódus-

ban,tilápián. Atestsúlyahatodikhétvégéreasoportokközöttszigni-

kánsaneltért,akövetkez®sorrendetkövetve: halolaj>lenolaj>szójaolaj

kezelés. Ahalolajetetésmellettalésúlya(6. hét)ismeghaladtaaszó-

jaolajkezelésnélmértértékeket. Atilápiaszövetekeltér®lipidfrakióinak

zsírsavproljábanazttapasztaltuk,hogyatakarmányeredet¶növényiola-

jok zsírsavai nagyon nagyhatékonysággal, éssok esetben az egyszer¶

kihígulásimodellel -jólbesülhet®mértékbenépülnekbeatilápia léés

májtriglieridekbeésfoszfolipidekbe,deakétfrakióbaeltér®arányban.

Eredményeink szerint atilápia képesatakarmánybanbiztosított zsírsav

prekurzort(

α

-linolénsav)DHA-vá konvertálni, a lé triglieridekvonat- kozásában. Igazoltuk továbbá, hogy atakarmány lipidjei atelítetlenség

mértékénekmegfelel®enfokozzák amájbeliinvivolipidperoxidáiót.

(21)

4. Összefoglalás

Adisszertáióbafoglalteredmények2004 ótaelkészült,alegtöbbeset-

benaz OTKA (D048413, 83150), az NKTH (4/023, 3/023)és az MTA

(BO/108/07 és BO/26/11/4) által támogatott kutatási projektekb®l, a

posztdoktoriésazaztkövet®id®szakbólszármaznakésnégynagytéma-

körbesorolhatók. Tekintettel arra, hogy ezekjelent®sen elkülönülnek,a

f®bberedményeketisnégyestagolásbanfoglalomössze.

4.1. Jelent®sen eltér® energetikai állapotok meta-

bolikushatásainakjellemzésebaromfajokklinikai-

kémiai vizsgálatával

Azáltalunkis alkalmazottklinikai-biokémaimódszertanazállatorvosi

dignosztikábanszéleskörbenelterjedt,kvázirutineljárás. Ennekellenére

saját, els®sorban baromfajokon, többkorsoportban végzettrendszeres

elemzéseinkszintehiánypótlónakszámítottak,els®sorbanavizsgált(spe-

iálisankezeltvagyszelektált)állományokegyirányúszelekiója okán. A

tojótyúkokmesterségesvedletésesoránrészletesenjellemeztükaztameta-

bolikusésenzimatikusadaptáiót,melyeta12napiteljestakarmánymeg-

vonásindukált. Amódszeralkalmasvoltalipidtartalékokkimerülésének

fokozatos nyomonkövetésére, valaminta nagymérték¶fehérje kataboliz-

mus,illetveasökkentzikaiaktivitásjellegzeteshatásainakpontosleírá-

sára. A hústermelésreszelektált brojler éspulykaállományokonvégzett

részletes,afelneveléstöbbid®pontjánkivitelezettelemzésmindasonto-

zat,mindpediganagynövekedésiütem¶vázizomzatfejl®désénekpontos

jellemzésérevoltalkalmas. Kiemelked®fontosságú eredmény,hogymind-

kétfajban már a kelést követ®en el®rejelezhet®nek bizonyult a fokozott

izomhipertróaokoztaszakrolemmasérülés(kreatinkináz). Amódszer-

tannemsakapatoziológiás,hanemanormálélettanifolyamatok(tojás-

szikdepléió, vedlés, lassuló osszikáió)pontoskimutatásátis lehet®vé

tette.

4.2. Az energetikai status hatása a szöveti lipid-

frakiók zsírsavösszetételére madárfajokban

A4.1. pontbanvérbiokémiaianalízisselvizsgáltmadarak(speiálisan

kezeltvagyszelektáltállományok)olyankülönlegesenergetikaisajátossá-

gokkalvagyeltérésekkelrendelkeznek,melyekszervezetszint¶adaptáiót

feltételeznek. Asejtmembránokszintjénfennállólipid-fehérje interakiók

okánamembránlipidekmintazanyagsereütemadóiértelmezhet®k,me-

lyetHulbertésElse(J.Theor. Biol.,1999,257277)átfogóelméletükben

amembránlipidösszetétel,aszövetiszint¶anyagsere,végülpedigaszer-

(22)

vezetalapanyagsereintenzitásánakkorrelatívösszefüggésekéntértelmez-

tek.Azállandótesth®méséklet¶állatokszerveirevonatkozóanels®sorban

eml®seredményekvoltak elérhet®k. A madarak, különösenpedig a rö-

vidélettartamú,er®sszövetilipidperoxidáióvaljellemezhet®baromfajok

körében szívizom,vese, máj, tüd® (teljes tüd®ésparenyma) éssurfa-

tantstruktúrálisésszekretáltfoszfolipidekbenigazoltukamembránlipidek

többzsírsavkomponensénekszignikánstestsúlyfüggését. Azáltalunkle-

írtösszefüggésekegybevágnakametabolikusütemdóelmélettel,bizonyos

mértékbenkiterjesztveazt(szekretáltfoszfolipidekre). Abaromfajokkö-

rébenvégzettelemzéssorán mindenemlítettszövettípusbanismétl®d®en

ésmegbízhatóan igazoltuk, hogy a testsúly(az azzal allometrikus kap-

solatbanállóalapanyagsereintenzitásrévén)negatívkapsolatbanálla

membránlipidekdokozahexaénsav részarányával, melypedig szignikáns

korreláiótmutataszövetilipidperoxidáió mértékével.

4.3. A szöveti triglieridek összetételének natív

alakulása; a faj- és fajta azonosítás lehet®ségei a

TGmolekulaszerkezetrészletesanalízisérealapozva

(regiospeikus analízis)

Els®lépésbenhét faj b®ralatti zsírszövetében,majdpedig két, er®sen

eltér®sertésfajta hétszervénektriglieridtartalmábanvizsgáltukatrigli-

eridmolekulaszerkezetet(azsírsavakhelyzetimegoszlása),azesetlegesen

fennállófaj-,illetvefajta-determinált eltérésekkimutatására, illetve erre

alapozvaafaj-vagyfajtaazonosításlehet®ségeérdekében.Akidolgozott,

részleges hidrolízisen és többszörös kromatográás elválasztáson alapuló

mintael®készítés, majd a 2-monoglierid és triglierid frakiókra vonat-

koztatottgázkromatográás eredményekértelmezéséreúj mutatótvezet-

tünkbe. Azún. helyzeti megoszlási faktora glierint széls® ésközéps®

helyzetbenészterez®zsírsavak hányadosánaklogaritmusakéntgyakorlati-

lagfüggetlenatakarmányeredet¶zsírsavaktól,ugyanisinformáiótartalma

atriglierid molekulafelépítéséreirányul. Ahelyzetimegoszlásifaktorra

alapozvakér®dz®ésmonogasztrikus eml®sésmadárfajokbanminden-

ev®, növényev® és ragadozó táplálkozás mellett meghatároztuk a faji

sajátosságokataregiospeikuszsírsavprolban,faj-elkülönítéstlehet®vé

téve. A módszerasertésfajták megbízhatóelkülönítésérenembizonyult

alkalmasnak, igazoltuk ugyanakkor azt a bioszintetikus szabályosságot,

melyszerintazonosszénlánhosszúságúéstelítetlenség¶zsírsavakközüla

szimmetrikusformaközéps®helyzetiailezésepreferált(aglierinmoleku-

lán).Eredményeinkazsírszövetsajátosságai(alasonyoxidatívérzékeny-

ség)okánakártovábbfeldolgozottélemiszertermékekeredeténekigazolása

soránisalkalmazhatóklehetnek.

(23)

4.4. A takarmányeredet¶ zsírsavak szöveti lipi-

dekbeéslipidfrakiókbatörtén®beépülésénekvizs-

gálata, halakban

Azn3zsírsavakhalolajhelyettnövényiolajjaltörtén®bevitelenapjaink

hal-takarmányozásában igen elterjedt módszer, mely alapvet®en kihasz-

nálja a halak fokozott zsírsav-elongáiós képességét. Részleteiben nem

ismertugyanakkor, hogya nagymérték¶n3zsírsav bevitelemilyen hús-

min®ségiváltozásokkaljár,illetvehogyazsírsavakinkorporáiójamilyen

dinamikát mutat, különösen eltér®funkiójúés összetétel¶ lipidfrakiók

esetében. Vizsgálatainksoránigazoltuk,hogyafokozott,növényieredet¶

n3zsírsavbevitelkedvez®tlenülhatahalhúsvíztartóképességére,illetveaz

egyszer¶zsírsavkihígulásimodelleredményeirealapozvaajánlásttettünk

afrikai harsa esetébena befejez® takarmányozás hosszára vonatkozóan.

Tilápia szöveti lipidfrakióiban négyhetes etetési periódust követ®en jól

besülhet® zsírsav beépülésiütemet igazoltunk, mely jólegybevágott az

afrikaiharsaesetébentapasztaltakkal, ugyanakkorer®senfokoztaaszö-

veti lipidperoxidáiót, ezzel negatívanbefolyásolva a hal-eredet¶termék

min®ségét,oxidatívstabilitását.

(24)

5. Új tudományos eredmények

Tojótyúkokmesterségesvedletéseminter®senenergiahiányosállapot

idejénrészletesenjellemeztükamadarakmetabolikusreakióit,vérbioké-

miaiparaméterekrealapozva.

Nagy növekedési erély¶, hústermel®pulykaés brojlersirke állomá-

nyokbanszéleskör¶,sreeningjelleg¶klinikai-kémiaiadatállománytközöl-

tünk,ateljesfelnevelésiperiódusravonatkozóanésfelhívtukagyelmeta

hústermelésreirányuló,egyoldalúszelekiókároshatásaira(kreatinkináz,

K,laktátdehidrogenáz).

5.2. Az energetikai status hatása a szöveti lipid-

frakiók zsírsavösszetételére madárfajokban

Els®ként igazoltuk, hogyamadárszívmembránlipidekzsírsavössze-

tétele,aszövetimalondialdehidtartalomésatestsúlyközöttszoros,allo-

metrikusösszefüggésállfenn.

Els®kéntközöltünkadatokatamadárvese, teljestüd®ésmájösszes

foszfolipidfrakiózsírsavprolja,valamintazinvivolipidperoxidáióésa

testsúlyszignikáns,allometrikusösszefüggésérevonatkozóan.

Els®kéntigazoltuk,hogyateljesmadártüd®benmindaparenhyma,

mindpedigasurfatant foszfolipidekzsírsavprolja(struktúrálisésszek-

retáltfoszfolipidek)szignikáns,allometrikusösszetételiszabályosságokat

mutat, melyben meghatározóa dokozahexaénsav részarányának negatív

allometrikusalakulása.

alakulása; a faj- és fajta azonosítás lehet®ségei a

TGmolekulaszerkezetrészletesanalízisérealapozva

(regiospeikus analízis)

Hatékony módszert fejlesztettünk a szöveti triglieridek fajonkénti

eltéréseinekvizsgálatára,lehet®ségetbiztosítvaafajokmintáinakmegbíz-

hatóelkülönítésére is,egyolyanszövettípusban,melygenetikaivizsgála-

tokrakevésbéalkalmas.

(25)

gálata, halakban

Igazoltuk,hogyafrikaiharsa léjébenafokozotttakarmányeredet¶

n3zsírsavbeviteljelent®senésrészbenkedvez®tlenülmódosítjaahúsmin®-

séget,azsírsavakinkorporáiójapedig jólbesülhet®azsírsavkihígulási

modellsegítségével.

Igazoltuk, hogy nemsak a ragadozó, hanem növényev® halakban,

azok több szövetének f®bb lipidfrakióiban jelent®s és jól el®rejelezhet®

arány-összetételiváltozástidéznekel®atakarmányeredet¶n3zsírsavak.

(26)

6. A gyakorlatban hasznosítható eredmé-

nyek

Tojótyúkesetébenakorábbanszéleskörbenalkalmazottésazótabe-

tiltott,teljestakarmánymegvonásonalapulómesterségesvedletésimódszer

kedvez®tlenélettanihatásairavonatkozóadatokatközöltünk.

Intenzívhústermelésreszelektáltbrojleréspulykavonalakbanátfogó

jellemzéstadtunkspeiálisbarom populáiókklinikai-kémiaiparaméte-

reir®l,többkorsoportban,melyatermel®állományokszintjénrefereni-

akéntalkalmazhatónakbizonyult.

6.2. Az energetikai status hatásának elemzése a

szöveti lipidfrakiók zsírsavösszetételére madárfa-

jokban

Apulykamellizomzatimembránlipidekatipikusösszetételi változása

afelnevelés alatt(kapsolódvaavérklinikai-kémiaiparamétereirevonat-

kozóadatokhoz) felhívja a gyelmet e nagy növekedési erély¶madárfaj

szelekiójánakhatározottankáros(ésrészleteibeneddigismeretlen)hatá-

saira.

A testméret, a metabolikusan aktív szervek membránlipid zsírsav-

összetétele és a szöveti lipidperoxidáió mértékének szoros összefüggése

els®sorbanavárhatóélettartamésaperoxidatívkárosodáskapsánbizto-

sítúj,beslésekreisalkalmasadatállományt.

alakulásána leírásak a faj- és fajta azonosítás le-

het®ségeinek felmérése érdekében

Aszövetitriglieridekfajonkéntieltéréseinekfeltárásafriss,tároltés

továbbfeldolgozott (esetlegtermékbekevert)zsírokesetébenis alkalmaz-

hatómódszertan,melyatermékekeredetazonosításábanjelent®stámpont

lehet,els®sorbanazélelmiszeriaparban(deakárigazságügyivizsgálatokis

felmerülhetnek). Fontoskiegészítés,hogyakidolgozott módszerakárol-

vasztással nyert állati zsiradékokon is alkalmazható, egy olyan, jelent®s

mennyiségbenel®állóállatiterméken,melyesetébenagenetikaialapúfaj-

meghatározásnemlehetséges.

(27)

gálata, halakban

A takarmányeredet¶n3zsírsavak fokozottésid®zített, vagymegha-

tározottid®tartamúbevitele,illetveavárhatószövetizsírsavprolpontos

besülhet®ségenagybansegíti a befejez®takarmányozásoptimalizálását.

A kihígulási modell alkalmazása a bevont paraméterekre alapozva költ-

séges analitikai eljárást, agázkromatográás zsírsavprol elemzést segít

kiváltaniegyszer¶súlyméréssel.

(28)

7. A tézisek fejezeteinek megfeleltethet®

saját publikáiók listája

7.1.1. Eltér®energetikaiállapotokmetabolikushatásainakjellem-

zésebaromfajok klinikai-kémiai vizsgálatával

Romvári,R.,Szabó,A.,Andrássy-Baka,G., Süt®,Z. Molnár,T., Bázár,

Gy.,Horn,P.(2005): Trakingforedmoultbyomputertomographyand

serumbiohemialparametersinlayinghens. Arh.Geügelk. 69(6):245-

251.

Szabó, A.,Mézes, M., Horn, P.,Süt®, Z., Romvári,R.(2005): Develop-

mental dynamisof some blood biohemial parameters inthe growing

turkey(Meleagrisgallopavo). AtaVet. Hung. 53(4):397-409.

7.1.1.3. Abrojlersirke kliniko-kémiaivizsgálata(follow-up) a

teljesfelnevelésalatt

Szabó,A.,Milisits,G.(2007): Cliniohemialfollow-upofbroilerrearing

-ave-weekstudy. AtaVet. Hung. 55(4):451-462.

Szabó,A.,Fébel,H.,Mézes,M.,Horn,P.,Balogh,K.,Romvári,R.(2005):

Dierentialutilizationofhepatiandmyoardialfattyaidsduringfored

moultoflayinghens. PoultrySi. 84(1):106-112.

Szabó,A.,Fébel,H.,Horn,P.,Bázár,Gy.,Romvári,R.(2006): Ontogeni

developmentofthefattyaylhainompositionoftheturkey(Meleagris

gallopavo) petoralis musle membranes(an allometriapproah). Ata

Biol. Hung.57(2):165-180.

membránlipidjei,allometrikusanalízis

Szabó,A.,Fébel,H.,Mézes,M.,Balogh,K.,Horn,P.,Romvári,R.(2006):

Bodysize relatedadaptationsoftheavianmyoardialphospholipidfatty

aylhainomposition.Comp. Biohem. Physiol. B.144(4):496-502.

Szabó,A.,Mézes, M., Romvári,R.,Fébel,H.(2010): Allometrisaling

(29)

offattyayl hainsinfowlliver,lungand kidneybutnotinbrainphos-

pholipids. Comp. Biohem. Physiol. B.155(3):301-308.

7.1.2.5. Atüd®parenhymaliséssurfatantfoszfolipidjeinekal-

lometrikuselemzése baromfajokban

Szabó,A.,Mézes,M.,Balogh,K.,Romvári,R.,Horn,P.,Fébel,H.(2012):

Negativeallometry ofdoosahexaenoiaid inthefowllungand pulmo-

narysurfatantphospholipids. AtaBiol. Hung. 63(2):202-217.

7.1.3. A szöveti triglieridek összetételének natív alakulása; a

faj-ésfajtaazonosításlehet®ségeiaTGmolekulaszerkezetrész-

letesanalízisére alapozva (regiospeikus analízis)

7.1.3.1. Afajspeikustulajdonságokelemzésetriglieridekmo-

lekulaszerkezetivizsgálatára alapozva

Szabó,A.,Fébel,H.,Sugár,L., Romvári,R.(2007): Fattyaid regiodis-

tributionanalysisofdivergentanimaltriaylglyerolsamplesapossible

approahforspeiesdierentiation.J.FoodLipids. 14(1):62-77.

Szabó,A.,Horn,P.,Romvári,R.,Házas,Z.,Fébel,H.(2010):Comparison

ofMangaliaandHungarianLargeWhitepigsatidentialbodyweightII.

Fattyaid regiodistributionanalysisof thetriaylglyerols. Arhivfür

Tierzuht. 53(2):147-161.

7.1.4. A takarmányeredet¶ zsírsavak szövetilipidekbe éslipid-

lakban

7.1.4.1. Afrikaiharsalézsírsavösszetételeéshúsmin®sége,nö-

vényiolajok etetésétkövet®en

Szabó,A.,Romvári,R.,Szathmári,L.,Molnár,T.,Losmándi,L.,Bázár,

Gy.,Molnár,E.,Horn,P.,Hanz,Cs. (2009): Eetsofdietaryvegetable

oilsupplementationonlletquality traits,hemialand fatty aid om-

positionofAfrianatsh(Clariasgariepinus). ArhivfürTierzuht. 52:

321-333.

7.1.4.2. Növényi olajok szöveti lipidfrakiókba való beépülésé-

nekelemzése Nílusi tilápia (Oreohromis nilotius)szerveiben

Szabó,A.,Mézes,M.,Hanz,Cs.,Molnár,T.,Romvári,R.,Varga,D.,Fé-

bel,H.(2011): Inorporationdynamisofdietaryvegetableoilfattyaids

intothetriaylglyerolsandphospholipidsoftilapia(Oreohromis niloti-

us)tissues(llet,liver,viseralfatandgonads). AquaultureNutrition.

(17):132-147.

(30)

8. Köszönetnyilvánítás

HálásköszönetemetszeretnémkifejezniHornPéterakadémikusésRom-

váriRóbertprofesszor uraknakazértaz1998 ótanyújtottönzetlenszak-

maiéserkölsitámogatásért,melynélkülsemabemutatottmunka,sema

dolgozatnemkészültvolnael. Köszönömmentoraimnak,KovásMelinda

akadémikus asszonynak és Sarudi Imre professzor úrnak a szemléletfor-

málótanítást! Ezútonszeretném ®szinteköszönetemetkifejezni Szendr®

Zsolt professzor úrnak támogatásáért, Dr. Fébel Hedvignekaz analiti-

kaimunkáért,MézesMiklósakadémikusúrnakalipidperoxidáióvalkap-

solatos segítségéért. Az egyetemi források mellett OTKA Iroda és az

Akadémia Bolyai János Kutatási Ösztöndíj Kuratóriuma a bemutatott

eredmények megteremtését öt, illetve hat éves id®szakokban támogatta,

amiértehelyenisköszönetetmondok.

KülönköszönetteléshálávaltartozomCsaládomnakésSzüleimnek,tü-

relmükértéstoleraniájukért.

TA Dki Éekezé Téziei

γ

α

γ

Δ

α

TA Dki Éekezé Téziei