R I O K É M IA A Magyar

R I O K É M I A

A Magyar Biokémiai Egyesület i n t e r n e t e s folyóirata 2 0 1 6 . d e c e m b e r

. S í

e g y e s í t e t t k é p

D N S

GFP (Rab7 RNSI) mCherry-Atg8a

B I O K É M I A

A M a g y a r Biokémiai Egyesület i n t e r n e t e s folyóirata Szerkesztő b i zottsá g :

Bősze S z ilvia , Erdődi F e r e n c , I f j . G a l l y a s F e r e n c , G e i s z t Miklós, K i r i c s i Mónika (titkár), M a k s a y Gábor, N y i t r a y László, S a r k a d i Balázs,

Székács András, S z a n d y Z s u z s a Főszerkesztő:

S z ű c s M á r i a s z u c s . r n a r i a @ b r c . r n t a . h u

T e c h n i k a i szerkesztő:

B é r d i P é t e r i n f o @ r e m e k d e s i g n . h u

X L . É V F O L Y A M 4 . S Z Á M 2 0 1 6 . d e c e m b e r T A R T A L O M J E G Y Z É K

Címlapkép:

A Rab7 kis GTPáz szükséges a pirossal jelölt autófág vezikulák fúziójához (Lőrincz Péter felvétele, lásd Takáts Szabolcs és Juhász Gábor írását, 30. oldal) A K I K R E BÜSZKÉK V A G Y U N K

Kitüntetések, díjak , , , , 4 .

W o l l e m a n n Mária: Emlékezés a z elmúlt időkre 5 . F I A T A L KUTATÓK MŰHELYEI

Szűcs Diána és P a n k o t a i T i b o r : A D N S károsodások által kiváltott sejtválaszok tanulmányozása emlős s e j t e k b e n és i n v i v o D r o s o p h i l a

m o d e ll rend s z e r b e n 1 7 .

R E V I E W

Takáts S z a b o l c s és Juhász Gábor: A z autofágia élettani vizsgálatáért

odaítélt Nobel-díj 3 0 . T U D O M Á N Y O S KÖZLEMÉNY

S c h e e r Ildikó, Róna G e r g e l y , Vértessy G . Beáta: A D N S - b e l i u r a c i l

kvantifikálása e g y érzékeny jelölő módszerrel , , 4 0 . VISSZATEKINTÉS A Z ELMÚLT 5 0 ÉV KIEMELKEDŐ C I K K E I R E

P a t t h y László: Moduláris fehérje evolúció és e x o n - s h u f f l i n g 5 2 . K O N F E R E N C I A BESZÁMOLÓK

A z M B K E 2 0 1 6 . évi vándorgyűlése, S z e g e d , 6 3 . 2^{n d} D a n u b e S c i e n t i f i c C o n f e r e n c e o n E p i g e n e t i c s , B u d a p e s t , 6 6 . K O N F E R E N C I A HIRDETÉSEK

Hungárián M o l e c u l a r Lif e S c i e n c e s , 2 0 1 7 - Molekuláris Élettudományi

K o n f e r e n c i a , 2 0 1 7 6 9 . F E B S k o n f e r e n c i a 2 0 1 7 7 0 . FELHÍVÁSOK

A 2 0 1 6 . évi kiemelkedő c i k k e k istájának bekü dése 7 2 . Alapítvány a Tudományos Szemészetéit pályázat , 7 3 .

ÁLLÁSHIRDETÉS 7 4 . T U D O M Á N Y ÉS MŰVÉSZET

Gráf László: A n a g y évfolyam 7 5 .

4 0 1 2 D e b r e c e n , P f . 6, h t t p : / / w w w . m b k e g y . h u F e l e l ő s k i a d ó D r . F é s ű s László és D r . B u d a y L á s z l ó

A z e n g e d é l y s z á m a I I I/ S Z I / 3 9 7 / 1 9 7 7

H U I S S N 2 0 6 0 9 1 5 2 ( O n l i n e ) | H U I S S N 0 1 3 3 - 8 4 5 5 ( N y o m t a t o t t )

F I A T A L K U T A T Ó K M Ű H E L Y E I Szűcs Diána ós Pánkotäi Tibor

A D N S KÁROSODÁSOK ÁLTAL KIVÁLTOTT SEJTVÁLASZOK TANULMÁNYOZÁSA EMLŐS S E J T E K B E N ÉS I N V I V O

D R O S O P H I L A M O D E L L R E N D S Z E R B E N

Szűcs Diána és Pankotaí T i b o r

S Z T E T T I K Biokémiai és Molekuláris Biológiai Tanszék, G e n o m Integritás és D N S Hibajavítás Kutatócsoport

A D N S károsodások á l t a l kiváltott sejtválaszok

A z eukarióta élőlények s e j t m a g i D N S állománya számos kondenzációs lépésen keresztül kromoszómákba szerveződik. A k r o m a t i n s z e r k e z e t felépítésében a h i s z t o n fehérjék ( H l , H 2 A , H 2 B , H 3 , H 4 ) esszenciális s z e r e p e t játszanak. A H 2 A - H 2 B , H 3 - H 4 h i s z t o n h e t e r o d im e r e k két-két kópiája a l k o t j a a z o k t a m e r s z e r k e z e t e t , m e l y r e a D N S 1 4 7 bázispár hosszúságú s z a k a s z o n t e k e r e d i k f e l . í g y jön létre a nukleoszóma, m e l y n e k szerkezetét a H l h i s z t o n o k kötődése s t a b i ­ lizálja. A nukleoszómák alakítják k i a z ú n . „gyöngyfüzér struktúrát", m e l y a kromoszómát alkotó D N S m o l e k ula e r e d e t i hosszát egyharmadára csökkenti, m a j d további lépések során a m é g tömörebb „szolenoid" s z e r k e z e t j ö n létre. A legkondenzáltabb kromoszóma s z e r k e z e t a metafázisban figyelhető m e g , m e l y a s e j t e k osztódása során már fénymikroszkóp a l a t t i s látható.

A z eukarióta s e j t e k b e n a D N S - t templátként használó f o l y a m a t o k leját­

szódásához ( p l . transzkripció, replikáció) szükséges a kondenzált k r o m a t i n s z e r k e z e t fellazulása. E z e n struktúra d i n a m i k u s változásainak szabályozásában kulcsfontosságúak a h i s z t o n fehérjék oktamerből kinyúló, N-terminális f a r k i részén található a m i n o s a v a i n a k poszt-transzlációs módosításai ( P T M ) , E z e k a F T M - e k számos e g y e d i mintázatot h o z h a t n a k létre a h i s z t o n o k o n , mi v e l u g y a n ­ a z o n a z a m i n o s a v o l d a l láncon több típusú módosítás i s létrejöhet ( 1 . táblázat).

Feltételezések s z e r i n t a h i s z t o n fehérjéken megfigyelhető P T M mintázatok e g y e d i információ t a r t a l o m m a l r e n d e l k e z n e k , m ely e t his z t o n kód hipotézisnek nevezünk. A z e g y e s P T M - e k e g y d i n a m i k u s a n változó r e n d s z e r t alk o t n a k , m e l y e k kialakításáért és eltávolításáéit különböző k o m p l e x e k felelősek

BIOKÉMIA

X L . évfatyám 4. szám 2 0 1 6 . d e c e m b e r

( 1 . táblázat). A F T M mintázatok kialakulása hozzájárul a transzkripció, v a l a m i n t a r e p l i k a elő aktivá c l ójához és l e j á t s z ó d á s á h o z is , t o v á b b á szabályozza a környezeti stresszhatásokra b e k ö v e t k e z ő g y o r s és d i n a m i k u s k r o m a t i n s z e r k e z e t i változásokat i s . E n n e k l e g j o b b példája, h o g y a károsodott D N S k ö r n y e z e t é b e n a k r o m a t i n s z e r k e z e t f e l l a z u l , így lehetővé válik a hibajavító fehérjék kötődése a károsodott D N S régióhoz.

1 , táblázat A h i s z t o n o k a m i n o s a v oldalláncain létrejövő poszt-transzlációs módosítá­

s o k és a z a z o k a t létrehozó v a g y eltávolító k r o m a t i n módosító k o m p l e x e k bemutatása.

Afninnanv V:•• l>:•. 1 - í i \i|:•.• M á d a i i t á i t I t t e r h c j ó tnz im -:>!••• -ilrf-.: clE-DvnlitDeiuirn

LiEin

K E t i l á c i ó Hisrton í c e t ü t r i n i E - T f a r i z H i í s f o n 4*£ceti 32 LiEin meti la-: ic' M i i i t a r rndiltrjnsrfc-raz Hi yz*.on dc-meliláz

LiEin

•jfciquiíi l.i. l i E3 utni^L-iCiú l i ^ i l D é U L i q u itlriál

LiEin

rfcezl éc ó ^ClP-'ibÓs prjl "-i^ráz U P - i i b d a h i d r a l á z

j i t r i n F D t i f o r i l J r i á Fns-zfjtaz

m r c u r i n foiHí mácio

Anglnln melllictó -üsztüíi rne-iiltransiTeráj - h u : c r L É n y i l a z

A z e n d o g é n - és e x o g é n f o n á s b ó l s z á r m a z ó D N S károsító ágensek változást idéznek elő a D N S s z e r k e z e t é b e n , így veszélyeztetik a g e n o m stabilitását [ 1 , 2 ] . A különböző D N S sérülések eltérő hibajavító útvonalak aktiválódását e r e d ­ m é n y e z i k : replikáciös hibák - M i s m a t c h hibajavítás; oxidáció, alkiláció - Bázis­

kivágó hibajavítás; t i m i n - d i m e r e k - Nukleotid-kivágó hibajavítás, v a l a m i n t a D N S mindkét szálának eltűrésekor aktiválódó kettős-szálú D N S t ö r é s hibajavító útvonalak. A D N S hibajavítás m e l l e t t m e g f i g y e l t e k e g y a z z a l p á r h u z a m o s a n aktiválódó D N S károsodás hatására b e k ö v e t k e z ő sejtválaszt ( D N A D a r n a g e R e s p o n s e - D D R ) i s , a m e l y biztosítja a s e j t c i k l u s átmeneti felfüggesztését és a transzkripció, v a l a m i n t a replikáciő gátlását i s . A h i s z t o n F T M - e k a D N S hib a ­ javító útvonalak és a D D R m ű k ö d é s é r e i s j ele n t ő s hatást g y a k o r o l n a k , a hib a ­ javításban s z e r e p e t j á t s z ó fehérjék s z á m á r a f e l i s merő-/kötőhelyet biztosítva

[ 3 - 8 ] , A D N S sérülés g y o r s és precíz kijavításához szükséges a k r o m a t i n s z e r k e z e t f e l nyílása i s a D N S károsodás k ö r n y e z e t é b e n [ 6 - 1 4 ] . A D N S sérülés k ö r n y e z e t é b e n a n u k l e o s z ö m á k destabilizálódnak, m a j d a javítás befejeztével a h i s z t o n o k t a m e r e k reorganizációjával a z e r e d e t i k r o m a t i n s z e r k e z e t helyreállítá­

s a i s megtörténik [ 8 , 9 , 1 1 , 1 2 , 1 5 - 1 8 ] , A sérülés k ö r n y e z e t é b e n a P T M - e k ( p l .

BIOKÉMIA

X L . évjístyíím 4. szám 2 0 1 6 . d e c e m b e r :s

F I A T A L K U T A T Ó K M Ű H E L Y E I Szűcs Diána ós Pankotai Tibor

ubiquitiláció, acetlláció) hatására t o v á b b i his zton c h a p e r o n o k ( p l . N u c l e o l i n , A S F 1 , C A F - 1 ) és k r o r n a t l n m ó d o s í t ó k o m p l e x e k ( p l . T i p 6 0 , p 4 0 0 ) lépnek m ű k ö d é s b e . E z e k e g y ü t t e s hatása e g y n y i t o t t a b b k r o m a t i n s z e r k e z e t k i ­ alakulását segíti elő [ 2 , 7 - 1 1 , 1 4 - 1 7 ] . A D N S hibajavítás befejezése után a n u kle o s z ó m á k v i s s z a - h e l y e z é s é v e l e g y i d e j ű l e g a h e t e r o k r o m a t i k u s régiókra j e l l e m z ő fehérjék f e l h a l m o z ó d á s á v a l ( H P 1 , P C I ) el in dul e g y , a z e r e d e t i k r o m a t i n s z e r k e z e t visszaállítását elősegítő m e c h a n i z m u s [ 1 6 ] ,

A kettős-szálú D N S t ö r é s e k j a v í t á s á t főként a N e m - h o m o l ó g végek ö s s z e k a p ­ csolása ( N o n - h o m o l o g o u s E n d J o i n i n g - N H E J ) és a H o m o l ó g r e k o m b i n á c i ó ( H o m o l o g y D i r e c t e d R e p a i r - H D R ) hibajavító útvonalak végzik ( 1 . á b r a ) , e z e k m e lle t t léteznek alternatív u t a k i s ( Al te r n a t i v e E n d - J o i n i n g - A l t - E J / M M E J , S i n g l e S t r a n d A n n e a l i n g - S S A ) [ 2 , 7 , 8 , 1 2 , 1 9 ] , A két fő útvonal e l s ő s o r b a n s e j t c i k l u s függő m ó d o n aktiválódik, a N H E J a G ⁰ é s G i f á z i s b a n , m í g a H D R a z S és G ² fázisban j e l l e m z ő . A két hibajavító útvonal közti választást a z o n b a n j e l e n t ő s e n befolyásolja a sérülés k ö r n y e z e t é b e n m e g j e l e n ő his z t on P T M - e k m i n t á z a t a , a törés s e j t m a g o n belüli e l h e l y e z k e d é s e , a körülötte levő k r o m a t i n s z e r k e z e t , v a l a m i n t a s e j t t í p u s a i s [ 2 , 1 4 , 1 9 - 2 3 ] .

A D N S hibajavítást követően a z a d o t t régióra j e lle m z ő k r o m a t i n s z e r k e z e t v i s s z a r e n d e z ő d i k [ 1 1 , 1 8 ] . A z ú j o n n a n szintetizálódott h i s z t o n f e h é n e k b ő l a n u k l e o s z ó m á k a h i s z t o n c h a p e r o n o k s e g í t s é g é v e l újra s z e r v e z ő d n e k [ 9 , 1 1 , 1 5 - 1 7 ] . M i v e l a c i t o p l a z m á b a n ú j o n n a n létrejött h i s z t o n f e n é n e k e g y e d i P T M - e k e t h o r d o z n a k , a k r o m a t i n s z e r k e z e t b e történő beépülésük után a h i s z t o n m ó d o s í t ó k o m p l e x e k kialakítják a g e n o m i környezetre j e l l e m z ő h i s z t o n p o s z t ­ transzlációs m ó d o s í t á s o k a t [ 1 5 - 1 8 ] . E g y e s t a n u l m á n y o k s z e r i n t a z o n b a n a z e r e d e t i P T M mintázat n e m a l a k u l k i újra, h a n e m a z újonnan szintetizálódott h i s z t o n fehérjék eltérő m ó d o s í t á s a i jelként szolgálnak a z ellenőrző f o l y a m a t o k ­ b a n s z e r e p e t j á t s z ó fehérje k o m ple x e k s z á m á r a , így további felülvizsgálat alá h e l y e z i k a helyreállított D N S régiót [ 1 6 , 1 8 ] .

BIOKÉMIA

X L . évfuiyam 4. Szám 2 0 1 6 . f l u c e m b e r

19

1 , ábra, A kettős-szálú D N S törések hibajavító útvonalai (Timothy M. Thomson, Murid Ciserra-Rcbolio n y o m o n [33]). A NHFJ útvonalban elsőkónt a Ku70/80 heterodimer komplex kötődik gyűrűként illeszkedve a serült DNS végekhez, ezáltal dokkoló helyet biztosítva a DNA-PK fehérjének. A kötődést követően a DNA-PK autofoszforiláciő révén aktiválódik és foszforilélja az Artemis enüonukleázt, így az komplementer végeket kialakítva lehetővé teszi, hogy az XRCC4 és Cer-XLF fehérjék által a törés helyére irányított DNS ligáz IV összekapcsolja a sérült DNS szálakat. A HDR működéséhez szükség van a templátként szolgáló testvér kromatida jelenlétére.

A komplementer DNS szakasz keresése érdekében a törött DNS végeket egyes-szálú DNS-sé (ssDNS) alakítja az útvonalban elsőként kötődő MRN (Mrell-RaúSO-Nbsl) komplex a CtlP fehérjével együttműködve. Ezt követően az EXOl és DNA2 összehangoltan működve további hosszabb ssDNS szakaszokat hoz létre. Az ssDNS-hez az RPA kötődik, amely elősegíti a RADt-1 fehérje kötődését is. A RADSl-ssDNS filamertt a testvér kromatida komplementer szakaszával kapcsolatot létesít, így kialakítva a D-loop szerkezetet. A DNS szintézis során a DNS polimeráz 5 által beépített nukieotidok kapcsolódnak a 3' ssDNS véghez. Ezt a második hibridizációs eseményt követően a követő szál szintézise is elindul. Végezetül a kialakult Holilday szerkezet felbomlása következik be, és a fennmaradó nickeket a DNS ligáz IV kapcsolja össze.

A D N S károsító v e g y ü l e t e k é s a rák kialakulása közötti k a p c s o l a t o t els ő k é n t P e r c i v a l P a t t írta l e 1 7 7 5 - b e n [ 2 4 ] . A D N S kettős-hélix f e l f e d e z é s é t k ö v e t ő e n 1 9 5 5 - b e n igazolták, h o g y a m u t a g é n e k m e g v á l t o z t a t j á k a D N S kémiai s z e r k e z e t é t , ezáltal k a p c s o l a t m u t a t h a t ó k i a m u t a g e n e z i s és k a r c i n o g e n e z i s k ö z ö t t [ 2 5 ] , H a b á r 1 9 5 3 - b a n m á r f e l i s m e r t é k , h o g y a D N S hibák j a v í t h a t ó k , ú j a b b tíz év t elt e l , míg a X e r o d e r m a p i g m e n t o s u m b e t e g s é g r ő l igazolták, h o g y a D N S h i b a j a v í t á s d e f e k t u s a o k o z z a [ 2 6 , 2 7 ] . M i n d e z i d á i g s z á m o s D N S hib a ­ j a v í t á s b a n s z e r e p e t j á t s z ó t e h é n é r ő l k i m u t a t t á k , h o g y f u n k c i ó v e s z t é s e s m u t á c i ó j u k f i g y e l h e t ő m e g a t u m o r g e n e z i s s o r á n . A z e l m ú l t tíz év e r e d m é n y e i

BIOKÉMIA

X L . évftiiyam 4. szám 2 0 1 6 . d e c e m b e r

F I A T A L K U T A T Ó K M Ű H E L Y E I Szűcs Diáns és Pankotai Tibor

a z t bizonyítják, h o g y a D N S hibajavításban s z e r e p e t játszó A T M kináz és a rák kialakulása között s z o r o s k a p c s o l a t feltételezhető [ 2 8 ] . T o v á b b á igazolták, h o g y a his z t ono k ubiquitilációjában s z e r e p e t játszó B R C A 1 / 2 , R N F 8 / 1 6 8 E 3 u b l q u i t i n ligázok f e h é i j e szintjének c s ö k k e n é s e és növekedése i s megfigyelhető biz o n y o s t u m o r t í p u s o k b a n [ 2 9 ] , M i v e l a D N S hibajavítást vizsgáló t u d o m á n y t e r ü l e t mindösszesen pár évtizedet ölel f e l , ezért a z egész folyamatról c s a k kevés információval rendelkezünk.

A G e n o m I n t e g r i t á s és D N S Hibajavítás K u t a t ó c s o p o r t

A G e n o m Integritás és D N S Hibajavítás Kutatócsoport { 2 . ábra) 2 0 1 5 elején ala kul t a z S Z T E T T I K Biokémiai é s Molekuláris Biológiai Tanszéken T Á M O P , O T K A és M T A B o l y a i t á m o g a t á s s a l . Fő kutatási területünk a D N S károsodás által aktivált szignalizációs útvonalak térképezése. Célunk a n n a k megértése, h o g y a n történik a D N S törések azonosítása a z eukarióta k r o m a t i n s z e r k e z e t b e n , v a l a ­ min t a törések m i l y e n k r o m a t i n s z e r k e z e t i változásokat h o z n a k létre a hib a ­ javítás során. További kutatási témáink a következűk: a D N S károsodás során bekövetkező transzkripciónál i s válaszok jellemzése és a rák diagnosztikában alkalmazható potenciális b i o m a r k e r e k karakterizálása. A kérdéseink m e g v á l a ­ szolásához h u m á n sejtkultúrákat és D r o s o p h i l a m o d e l l r e n d s z e r t használunk, m e l y e k e n a l e g m o d e r n e b b biokémiai és g e n e t i k a i megközelítéseket ( k r o m a t i n immunprecipitáció, új generációs szekvenálás, szuperrezolúciós S T O R M mikroszkópia) alk al ma z zuk .

2 . ábra. A Genű/íi Integritás és D N S Hibajavítás Kutatócsoport t a g j a i . Első sor: Újfatudi Zsuzsanna, Majoros Hajnalka, Szűcs Diána, Borsos Barbara, Ördög Nóra. Második sor: Varga Árpád, Páhi Zoltán, Pankotai Tibor.

BIOKÉMIA

X L . évjsitytxm 4. íLÓns 2 0 ! 6. d e c e m b e r

K u t a t ó c s o p o r t u n k e g y o l y a n kísérleti r e n d s z e r előállítását t ű z t e k i c é l u l , a m e l y a z e g y e d i h i s z t o n F T M - e k D N S hibajavításra g y a k o r o l t h a t á s á n a k in vivő v i z s ­ gálatát t e s z i l e h e t ő v é . A k é r d é s e i n k m e g v á l a s z o l á s á h o z D r o s o p h i l a m o d e l l á l l a - t o k a t használunk, a m ely ekb en e g y e d ü l á l l ó lehetőség nyílik a z e n d o g é n h i s z t o n régió eltávolítására és a z általunk vizsgálni kívánt h i s z t o n m u t á c i ó k v i s s z a j u t ­ t a t á s á r a . A D r o s o p h i l a m o d e l l - r e n d s z e r b e n n y e r t e r e d m é n y e i n k e t e g é r é s h u m á n sejtkultúra r e n d s z e r e k b e n teszteljük, ezáltal o l y a n D N S hib a j a v í t á s b an f o n t o s k r o m a t i n s z e r k e z e t i v á l t o z á s o k a t a z o n o s í t h a t u n k , a m e l y e k á l t a l á n o s a n érvé n y e s e k m i n d e n m a g a s a b b rendű e u k a r i ó t a s z e r v e z e t r e . Első l é p é s k é n t előállítottuk a z e g y e d i his z t on g é n e k e t és a t e l j e s h i s z t o n k l a s z t e r t t a r t a l m a z ó p l a z m i d o k a t ( 3 . A á b r a ) .

A

3 , ábra. A H 2 A h i s z t o n poszt-transzlációs módosítások vizsgálatára a l k a l m a s kísérleti r e n d s z e r s e m a t i k u s ábrázolása A lépesek megegyeznek a Hl, H2B, MS Ós H4 hisztonok esetében is. (A) PCR segítségével előállítottunk egyedi hiszton géneket (bal oldal - H2A) és a teljes hiszton klasztert tartalmazó plazmidokat (jobb oldal). ( B ) A hiszton gének kódoló régióiban mutációkat hoztunk létre, valamint a hiszton klaszterből eltávolítottuk a vizsgálni kívánt hisztont kódoló DNS szakaszt (C) A pontmutáns hiszton géneket (kék kör részlet) és a deiéciós hiszton klasztert (zöld kör részlet) hordozó transzgentkus állatok keresztezéséből létrejöttek olyan egyedek, amelyek a mutációt tartalmazó H2A fehérjét termelik. (D) tzeket ez utódokat fel­

használva, meghatározott genomi pozíciókban kettős-szálú DNS törések indukálhatok a CRISPR- Cas9 rendszer alkalmazásával. ( E ) A pontmutáns H2A fehérjét tartalmazó állatokban vizsgálható

¿3 DNS hibajavítás kinetikája.

BIOKÉMIA

XL. évftiiyam 4. Szám 2 0 1 6 . d e c e m b e r

::

F I A T A L K U T A T Ó K M Ű H E L Y E I Szűcs Diána ós Pankotai Tibor

A h i s z t o n g é n e k b e n ( H l , H 2 A , H 2 B , H 3 , H 4 ) in vitro m u t a g e n e z l s s e g í t s é g é v e l m e g h a t á r o z o t t pozíciókban p o n t m u t á c i ő k a t h o z t u n k létre, a m e l y e k a h i s z t o n f e h é r j é b e n a m i n o s a v cserét e r e d m é n y e z n e k . A létrehozott mutációk e g y a d o t t P T M j e l e n l é t é t mimikaIják, v a g y a m ó d o s í t á s kialakulását a k a d á l y o z z á k ( 3 . B á b r a ) . E z z el p á r h u z a m o s a n a z előállított h i s z t o n k l a s z t e r e k b d l e g y - e g y h i s z t o n g é n t r é s z b e n v a g y t elj e s en eltávolítottunk ( 3 . B á b r a ) . A m u t á c i ó t h o r d o z ó h i s z t o n g é n e k e t és a deléciós k l a s z t e r e k e t D r o s o p h i l a k i ó n o z ó v e k t o r b a ( p U A S T - a t t B ) építettük, a m e l y a l k a l m a s t r a n s z g e n i k u s állatok l é t r e h o z á s á r a . A módosí­

t o t t h i s z t o n g é n e k e t és d e l é c i ó s k l a s z t e r e k e t t a r t a l m a z ó t r a n s z g e n i k u s D r o s o p h i ­ l a v o n a l a k e g y e d e i n e k k e r e s z t e z é s é b ő l l é t r e j ö n n e k o l y a n u t ó d o k , a m e l y e k c s a k a m u t á c i ó t h o r d o z ó his z t on fehérjét t e r m e l i k ( 3 . C ábra), E z e k b e n a z á l l a t o k b a n k e t t ő s - s z á l ú D N S t ö r é s e k e t h o z t u n k létre C R I S P R - C a s 9 r e n d s z e r s e g í t s é g é v e l , m a j d vizsgáltuk a D N S hibajavítás kinetikáját ( 3 . D - E á b r a ) .

A p r o j e k t részét k é p e z i o l y a n d e u b i q u i t i n á z o k ( D U B } a z o n o s í t á s a , a m e l y e k s z e r e p e t j á t s z h a t n a k a h i s z t o n - és n e m h i s z t o n t í p u s ú fehérjék d e u b i - quitilálásában e g y e s - és k e t t ő s - s z á l ú D N S t ö r é s e k hibajavítása s o r á n . E h h e z r e n d e l k e z é s ü n k r e áll a D r . Deák Péter ( S Z T E T T K G e n e t i k a T a n s z é k ) laboratóri­

u m á b a n eloá l i t o t t Dro s o p h ila t ürz s g yűj t emé n y , amely mi nd e n , a z e c e t m u s ­ licában a z o n o s í t o t t D U B g é n r e t a r t a l m a z d e l é c i ó s - v a g y s i R N S c s e n d e s í t é s t e r e d m é n y e z d t r a n s z g e n i k u s v o n a l a k a t . A t ö r z s g y ü j t e m é n y f e l h a s z n á l á s á v a l e g y r ö n t g e n , v a l a m i n t U V - B s u g á r f o r r á s o n a l a p u l ó s c r e e n - t v é g e z t ü n k . E r e d ¬ m é n y e i n k ala p j á n n é g y D U B f e h é í j é t a z o n o s í t o t t unk , a m e l y e k s z e r e p e t já t s z h a t - n a k a z U V és a r ö n t g e n s u g á r z á s által k e l e t k e z e t t D N S hibák j a v í t á s á b a n . A z azonosított fehérjék molekuláris k a r a k t e r i z á l á s a és a D N S hibajavító ú t v o n a l b a n betöltött s z e r e p é n e k tis z t á z á s a j e l e nle g i s f o l y a m a t b a n v a n .

A D r o s o p h i l a m o d e l l r e n d s z e r b e n azonosított, D N S h i b a j a v í t á s b a n s z e r e p e t j á t ­ szó h i s z t o n P T M - e k s z a b á l y o z ó f u n k c i ó j á n a k v i z s g á l a t á h o z h u m á n s e j t ­ t e n y é s z e t e k e t i s a l k a l m a z u n k . A D N S hibajavítás során a z e g y e s his z t on

BIOKÉMIA

X L . évfuiyam 4. Szám 2 0 1 6 . d v n e m b i T 23

módosítások szintbeli változását követjük n y o m o n , elsősorban i m m u n h i s z ­ tokémiai és k r o m a t i n immunprecipitációs kísérletekben.

A

1pm

E

~ t—" i

! ! •* _{y k ^ j y k ^ j}

^wS. ,fcx.tái3Lj«....!

_ . . 1 i i • M U UJ i_

1 pixel • 20 nm

4 . ábra. A D N S hibajavító fókuszokban megjelenő H 2 A X S 1 3 9 P h i s z t o n P T M eloszlásának tanulmányozása S T O R M mikroszkópiával. (A) A sejtekben látható hibajavítá­

si fókuszok konfokális mikroszkopiával készült képe. (B-D) A sejtmagok egy-egy részletének STORM technikával történő vizsgálata látható. (C-E) Mikroszkópos felvételek Mathlab program­

mal készült klaszter analízise figyelhető meg. (F) Az ábra mutatja az egyetlen hibajavítási fókuszban megfigyelhető, S139P módosítást hordozó H2AX hisztonok elhelyezkedését.

Kísérleteinkben véletlenszerű g e n o m i régiókban, v a l a m i n t irányítottan, s p e c i ­ fikus g e n o m i pozíciókban kettős-szálú D N S töréseket idézünk elő, m a j d a kezelést követően a z e g y e s h i s z t o n fehérjék acetiláltsági színtjének időbeni változását vizsgáljuk és azonosítjuk a z a z o k a t kialakító k r o m a t i n módosító k o m p l e x e k e t is [ 3 0 ] . Eredményeink segítenek a n n a k megértésében, h o g y a k r o m a t i n s z e r k e z e t h o g y a n befolyásolhatja a kromoszómális transzlokációk kialakulását, m e l y e k rákos f o l y a m a t o k h o z v e z e t h e t n e k . A biokémiai módszerek m e l l e t t a D N S törés környezetében kialakuló k r o m a t i n szerveződési változások

BIOKÉMIA

X L . évfolyam 4 . szám 2 0 1 6 d e c e m b e r :4

F I A T A L K U T A T Ó K M Ű H E L Y E I Szűcs Diána ós Pankotsi Tibor

3 d i m e n z i ó s eloszlását i s vizsgáljuk. E h h e z e g y e d i s e j t e k e n nagyfelbontású S T O R M mikroszkópiát alk al ma z u n k . Közel e g y év optimalizálást k ö v e t ő e n , e g y speciális immunfestési eljárás segítségével, képesek v a g y u n k a D N S hibajavítási fókuszokban közel 2 0 n r n - e s felbontás elérésére. E z lehetővé t e s z i a sérült D N S régiókban létrejövő n y i t o t t a b b és zártabb k r o m a t i n régiók további vizsgálatát é s a z a d a t a i n k összevetését a biokémiai kísérleteinkben n y e r t e r e d m é n y e i n k k e l . M i v e l a 2 0 n m - e s felbontás elérésével láthatóvá t e h e t ő a D N S k á r o s o d á s k ö r n y e z e t é b e n található nukleoszőmák m e n n y i s é g e é s a P T M - e k eloszlása, ezáltal e g y e d i sejtekből és eltérő g e n o m i régiókból nyerhetünk információt a k r o m a t i n szerkezetéről és a h i s z t o n P T M - e k terjedési távolságáról is ( 4 . ábra).

Laboratóriumunk h a r m a d i k fó p r o j e k t j e a n n a k m e g é r t é s e , h o g y a kettős-szálú D N S törések hibajavítása m i l y e n hatással v a n a transzkripció f o l y a m a t á r a . A p r o j e k t b e n korábban elvégzett m u n k a folytatásaként k i m u t a t t u k , h o g y a z R N S polimeráz I I ( R N S P I I ) által átíródö régiókban történő kettős-szálú D N S törések kialakulása a sérült génről t ö r t é n ő transzkripció leállását o k o z z a a h i b a k i ­ javításának i d e j e a l a t t , m a j d a javítás befejezése után a génátírás újraindul [ 3 1 , 3 2 ] . I g a z o l t u k , h o g y a transzkripció leállásához számos, a D N S hibajavításban s z e r e p e t j á t s z ó fehérje jelenléte szükséges, m i n t a K u 7 0 , p 5 3 és D N A - P K , K r o m a t i n immunprecipitáciös kísérletekkel i g a z o l t u k , h o g y a javítás idejére a z R N S P I I eltávolításra kerül a hibás D N S szálról, és mi nd a transzkripció iniciáció- j a , m i n d a z elongációja gátolt. S p e c i f i k u s i n h i b i t o r o k é s s i R N S csendesítés segítségével bizonyítottuk, h o g y a z R N S P I I proteoszómális d e g r a d á c i ó útján kerül lebontásra. A z előzetes v á r a k o z á s o k k a l ellentétben a z R N S P I I megállása a C T D S 2 hiperfoszforilációját e r e d m é n y e z i és a f o l y a m a t lezajlásához a f e n t említett hibajavító f a k t o r o k jelenléte szükséges. A hiperfoszforilált C T D kötőhelyként szolgál s z á m o s E 3 u b i q u i t i n ligáz s z á m á r a , a m e l y e k hatására a 2 6 S p r o t e a s z ö m á k b a n elkezdődik a z R N S P I I degradációja. Ellentétben a c i t o p l a z m a - tikus fehérje lebontással, a z R N S P I I degradációja a D N S sérülés közvetlen k ö r n y e z e t é b e n valósul m e g , m i v e l a D N S k á r o s o d á s után a sérült g é n e n megfigyelhető a 2 6 S p r o t e a s z ó m a 1 9 S és 2 0 S alegységeinek k ö t ő d é s e i s .

BIOKÉMIA

X L . év/eiyum 4. szám 2 0 1 6 . d e c e m b e r

::

Kísérleti e r e d m é n y e i n k rávilágítanak a r r a , h o g y - a Nukleotid-kivágó hib a ­ j a v í t á s h o z h a s o n l ó a n - a z R N S P I I k o m p l e x a transzkripción kívül s z e r e p e t j á t s z h a t a D N S hibák a z o n o s í t á s á b a n i s , miv e l a D N S hibajavító fehérjék D N S k á r o s o d á s nélkül i s kölcsön h a t n a k a normál R N S P I I cikl us b a n résztvevő t r a n s z ­ kripciós k o m p l e x s z e l . T o v á b b á , h a a D N S károsodás átíródó g é n e k e n j ö n létre, a D N S hibajavító f a k t o r o k segítik a transzkripció t e l j e s leállását a D N S hib a ­ javítás a l a t t , a m e l y során a z R N S P I I k o m p l e x e n történő foszforilációs é s u b i - quitilációs m ó d o s í t á s o k sorozatát elindítva biztosítják a z R N S P I I szabályozott, 2 S S p r o t e a s z ö m a által közvetített eltávolítását. Feltételezésünk s z e r i n t e l s ő s o r b a n e z a k a p c s o l a t biztosítja a D N S hibajavítás g y o r s lejátszódását, v a l a m i n t m e g g á t o l j a o l y a n hibás m R N S t e r m é k e k keletkezését, a m e l y e k t u m o ­ r o k indukciójára a l k a l m a s fehérjék t e r m e l ő d é s é t segíthetik e l ő .

A h o g y k o r á b b a n említettük, s z á m o s hibajavításban s z e r e p e t j á t s z ó fehérjéről i s m e r t , h o g y m u t á c i ó j a v a g y hiány a rákos f o l y a m a t o k elindulásához v e z e t h e t . Feltételezésünk s z e r i n t a D N S hibajavítás s e b e s s é g é t befolyásoló f o l y a m a t o k feltárása segíthet a t u m o r o s f o l y a m a t o k kialakulásának m e g é r t é s é b e n . R e m é n y e i n k s z e r i n t kutatásaink h a s z n o s n a k b i z o n y uln a k m a j d a h h o z , h o g y j o b b a n m e g é r t s ü k a f o l y a m a t molekuláris s z a b á l y o z á s á t és jelentőségét. M i n d ­ e z e k e n túl a D N S hibajavítás kinetikájának m e g i s m e r é s e segíthet feltárni, h o g y a k r o m a t i n s z e r k e z e t h o g y a n befolyásolhatja a transzlokáciök kialakulásának valószínűségét i s . T o v á b b á a r r a a kérdésre i s v á l a s z t a d h a t n a k , h o g y a t u m o r ­ g e n e z i s s o r á n kialakuló t u m o r őssejtek h o g y a n képesek a D N S hibajavítás h a t é k o n y s á g á n a k növelésével túlélni a k e m o - é s radioterápiás kezeléseket. í g y a z általunk használni kívánt kísérleti r e n d s z e r n a g y m é r t é k b e n hozzájárulhat o l y a n , e d dig n e m i s m e r t k r o m a t i n s z e r k e z e t e t érintő f o l y a m a t o k m e g é r t é s é h e z , a m e l y e k n e m c s a k új rákterápiás célpontok a z o n o s í t á s á t t e s z i k lehetővé, h a n e m rákellenes g y ó g y s z e r e k tesztelésének lehetőségeit i s .

BIOKÉMIA

X L . évftityctrn 4. Szám 2 0 1 6 . d v n c m b i T 26

F I A T A L K U T A T Ó K M Ű H E L Y E I Szűcs Diána ós Pankotai Tibor

I r o d a l o m j e g y z é k

[ I ] N a g y , Z . , S o u t o g l o u , E . ( 2 0 0 9 ) D N A r e p a i r : e a s y t o v i s u a l i z e , d i f f i c u l t t o e l u c i d a t e . Trends Celt Biol, 1 9 ( 1 1 } : 6 1 7 - 2 9 .

[ 2 ] C a n n a n , W . J . , P e d e r s o n , D. S . ( 2 0 1 6 ) M e c h a n i s m s a n d C o n s e q u e n c e s o f D o u b l e - S t r a n d D N A B r e a k F o r m a t i o n i n C h r o m a t i n . J Celt Physio), 2 3 1 ( 1 ) : 3 - 1 4 .

[ 3 ] J a c k s o n , S . P . , B a r t e k , J . ( 2 D 0 9 ) T h e D N A - d a m a g e r e s p o n s e i n h u m a n b i o l o g y a n d d i s e a s e . Nature, 4 6 1 ( 7 2 6 7 ) : 1 0 7 1 - 0 .

[ 4 ] J a c k s o n , S . P . , D u r o c h e r , D . ( 2 0 1 3 ) R e g u l a t i o n o f D N A d a m a g e r e s p o n s e s b y u b i q u i t i n a n d S U M O . Mo! Ceil, 4 9 ( 5 ) : 7 9 5 - 8 0 7 .

[ 5 ] L i u , Y . , L i , Y . , L u , X . ( 2 0 1 6 ) R e g u l a t o r s i n t h e D N A d a m a g e r e s p o n s e . Arch Biochem Biophys, 5 9 4 : 1 8 - 2 5 .

[ 6 ] G r e e n b e r g , R . A . ( 2 0 1 1 ) H i s t o n e t a i l s : D i r e c t i n g t h e c h r o m a t i n r e s p o n s e t o D N A d a m a g e . FEES Lett 5 8 5 ( 1 8 ) : 2 8 8 3- 9 0 .

[ 7 ] M i ller, K . M . , J a c k s o n , S . P . ( 2 0 1 2 ) H i s t o n e m a r k s : r e p a i r i n g D N A b r e a k s w i t h i n th e c o n t e x t o f c h r o m a t i n . Biochem Soc Trans, 4 0 ( 2 ) : 3 7 0 - 6 .

[ 8 ] P o l o , S . E . , J a c k s o n , S . P . ( 2 0 1 1 ) D y n a m i c s o f D N A d a m a g e r e s p o n s e p r o t e i n s a t D N A b r e a k s : a f o c u s o n p r o t e i n m o d i f i c a t i o n s . Genes Dev. 2 5 ( 5 ) : 4 0 9 - 3 3 . [ 9 ] A d a m , S . , D a b i n , 3., P o l o , S . E . ( 2 0 1 5 ) C h r o m a t i n p l a s t i c i t y i n r e s p o n s e t o

D N A d a m a g e : T h e s h a p e o f t h i n g s t o c o m e . DNA Repair (Amst), 3 2 : 1 2 0 - 6 . [ 1 0 ] C a o , L . L . , S h e n , C , Z h u , W. G . ( 2 0 1 6 ) H i s t o n e m o d i f i c a t i o n s i n D N A d a m a g e

r e s p o n s e . Sei China Life Sei, 5 9 ( 3 ) : 2 5 7 - 7 0 .

[ I I ] D a b i n , J . , F o r t u n y , A . , P o l o , S . E. ( 2 0 1 6 ) E pig e n o m e M a i n t e n a n c e in R e s p o n s e t o D N A D a m a g e . Mol Cell, 6 2 ( 5 ) : 7 1 2 - 2 7 .

[ 1 2 ] J e g g o , P . A . , D o w n s , J . A . ( 2 0 1 4 ) R o l e s o f c h r o m a t i n r e m o d e llers i n D N A d o u b l e s t r a n d b r e a k r e p air . Exp Ceil Res, 3 2 9 ( 1 ) : 6 9 - 7 7 .

[ 1 3 ] Krüh la k , M . J . , C e l e s t e , A . , D e llai re , G , , F e r n a n d e z - C a p e t i l l o , O . , Müller, W . G . , M c N a l l y , J . G . , B a z e t t - J o n e s , D . P . , N u s s e n z w e i g , A . ( 2 0 0 6 ) C h a n g e s i n c h r o m a t i n s t r u c t u r e a n d m o b i l i t y i n l i v i n g c e lls a t s i t e s o f D N A d o u b l e - s t r a n d b r e a k s . J Cell Biol, 1 7 2 ( 6 ) : 8 2 3 - 3 4 .

[ 1 4 ] G u r s o y - Y u z u g u l l u , O . , H o u s e , N . , P r i c e , B. D . ( 2 0 1 6 ) P a t c h i n g B r o k e n D N A : N u c l e o s o m e D y n a m i c s a n d t h e R e p a i r o f D N A B r e a k s . J Mo! Biol, 4 2 8 ( 9 P t B ) : 1 8 4 6 - 6 0 .

[ 1 5 ] P o l o , S . E . ( 2 0 1 5 ) R e s h a p i n g c h r o m a t i n a f t e r D N A d a m a g e : t h e c h o r e o g r a p h y o f h i s t o n e p r o t e i n s . J Mol Biol, All ( 3 ) : 6 2 6 - 3 6 .

[ 1 6 ] P o l o , S . E . , A l m o u z n i , G . ( 2 0 1 5 ) C h r o m a t i n d y n a m i c s a f t e r D N A d a m a g e : T h e l e g a c y o f t h e a c c e s s - r e p a i r - r e s t o r e m o d e l . DNA Repair (Amst), 3 6 :

1 1 4 - 2 1 .

BIOKÉMIA

X L . év/elyum 4. Szám 2 0 1 6 . d e c e m b e r 11

[ 1 7 ] S o r i a , G . , P o l o , S . E . , A l m o u z n i , G . ( 2 0 1 2 ) P r i m e , r e p ai r, r e s t o r e : t h e a c t i v e r o l e o f c h r o m a t i n in t h e D N A d a m a g e r e s p o n s e . Mol Ceil, 4 6 ( 6 ) : 7 2 2 - 3 4 . [ 1 8 ] P o l o , S . E . , A l m o u z n i , G . ( 2 0 0 7 ) D N A d a m a g e l e a v e s I t s m ar k o n c h r o m a t i n .

Ceil Cycle, 6 ( 1 9 ) : 2 3 5 5 - 9 .

[ 1 9 ] C e c c a l d i , R . , R o n d l n e l l i , B . , D A n d r e a , A . D . ( 2 0 1 6 ) R e p a i r P a t h w a y C h o i c e s a n d C o n s e g u e n c e s a t t h e D o u b l e - S t r a n d B r e a k . Trends Celt Biol, 2 6 ( 1 ) : 5 2 - 6 4 .

[ 2 0 ] L e m a l t r e , C , G r a b a r z , A . , T s o u r o u l a , K . , A n d r o n o v , L . , F u r s t , A . , P a n k o t a l , T . , H e y e r , V . , R o g i e r , M . , A t t w o o d , K . M . , K e s s l e r , P . , D e l l a l r e , G . , K l a h o l z , B . , R e i n a - S a n - M a i t l n , B . , S o u t o g l o u , E . ( 2 0 1 4 ) N u c l e a r p o s i t i o n d i c t a t e s D N A r e p a i r p a t h w a y c h o i c e . Genes Dev, 2 8 ( 2 2 ) : 2 4 5 0 - 6 3 .

[ 2 1 ] K a l o u s i , A . , S o u t o g l o u , E . ( 2 0 1 6 ) N u c l e a r c o m p a r t m e n t a l l z a t i o n o f D N A r e p a i r . Curr Opin Genet Dev, 3 7 : 1 4 8 - 5 7 .

[ 2 2 ] M i s t e l i , T . , S o u t o g l o u , E . ( 2 0 0 9 ) T h e e m e r g i n g r o l e o f n u c l e a r a r c h i t e c t u r e i n D N A r e p a i r a n d g e n o m e m a i n t e n a n c e . Nat Rev Moi Ceil Biol, 1 0 ( 4 ) : 2 4 3 - 5 4 .

[ 2 3 ] C h a p m a n , J . R . , T a y l o r , M . R . , B o u l t o n , S . J . ( 2 0 1 2 ) P l a y i n g t h e e n d g a m e : D N A d o u b l e - s t r a n d b r e a k r e p a i r p a t h w a y c h o i c e. Mol Cell, 4 7 ( 4 ) : 4 9 7 - 5 1 0 . [ 2 4] P o t t , P . ( 1 9 9 3 ) [ T h e f i r s t d e s c r i p t i o n o f a n o c c u p a t i o n a l c a n c e r I n 1 7 7 7

( s c r o t a l c a n c e r , c a n c e r o f c h i m n e y s w e e p s ) ] . Bull Soc Liban Hist Med, 4 : 9 8 - 1 0 1 .

[ 2 5 ] B u r d e t t e , W J . ( 1 9 5 5 ) T h e s i g n i f i c a n c e o f m u t a t i o n in r e l a t i o n t o the o r i g i n o f t u m o r s : a r e v i e w . Cancer Res, 1 5 ( 4 ) : 2 0 1 - 2 6 .

[ 2 6 ] H i l l , R . F . ( 1 9 5 8 ) A r a d i a t i o n - s e n s i t i v e m u t a n t o f E s c h e r i c h i a c o l i . Biochim Biophys Acta, 3 0 ( 3 ) : 6 3 6 - 7 .

[ 2 7 ] C l e a v e r , J . E . ( 1 9 6 9 ) X e r o d e r m a p i g m e n t o s u m : a h u m a n d i s e a s e in w h i c h a n in i t i a l s t a g e o f D N A r e p a i r i s d e f e c t i v e . Proc Natl Acad Set USA, 6 3 ( 2 ) : 4 2 8 - 3 5 .

[ 2 8 ] S h i l o h , Y . , T a b o r , E . , B e c k e r , Y. ( 1 9 8 2 ) C e l l u l a r h y p e r s e n s i t i v i t y t o n e o c a r z i n o s t a t l n in a t a x i a - t e l a n g i e c t a s i a s k i n f i b r o b l a s t s . Cancer Res, 42 ( 6 ) : 2 2 4 7 - 9 .

[ 2 9 ] L o r d , C . J . , A s h w o i t h , A . ( 2 0 1 3 ) M e c h a n i s m s o f r e s i s t a n c e t o t h e r a p i e s t a r g e t i n g B R C A - m u t a n t c a n c e r s . Nat Med, 19 ( 1 1 ) : 1 3 8 1 - 8 .

[ 3 0 ] P a n k o t a l , T . , K o m o n y i , O . , B o d a i , L., U j f a l u d l , Z . , M u r a t o g l u , S . , C l u r c i u , A . , T o r a , L., S z a b a d , J . , B o r o s , I . ( 2 0 0 5 ) T h e h o m o l o g o u s D r o s o p h l l a t r a n s c r i p t i o n a l a d a p t o r s A D A 2 a a n d A D A 2 b a r e b o t h r e g u i r e d f o r n o r m a l d e v e l o p m e n t b u t h a v e d i f f e r e n t f u n c t i o n s . Mol Ceil Biol, 25 ( 1 8 ) : 8 2 1 5 - 2 7 .

BIOKÉMIA

X L . évfolyam 4. szám 2 0 1 6 . d e c e m b e r

Szűcs Diána ós Pankotai Tibor

[ 3 1 ] P a n k o t a i , T . , B o n h o m m e , C , C h e n , D . , S o u t o g l o u , E . ( 2 0 1 2 ) D I M A P K c s - d e p e n d e n t a r r e s t o f R M A p o l y m e r a s e I I t r a n s c r i p t i o n in t h e p r e s e n c e o f D N A b r e a k s . Nat Struct Mol Bioi, 1 9 ( 3 ) : 2 7 6 - 8 2 .

[ 3 2 ] P a n k o t a i , T . , S o u t o g l o u , E . ( 2 0 1 3 ) D o u b l e s t r a n d b r e a k s : h u r d l e s f o r R N A p o l y r n e r a s e I I t r a n s c r i p t i o n ? Transcription, 4 ( 1 ) : 3 4 - 8 .

[ 3 3 ] T h o m s o n , T . M . , G u e r r a - R e b o l l o , M . ( 2 0 1 0 ) U b i q u i t i n a n d S U M O s i g n a l l i n g i n D N A r e p a i r . Biochem Soc Trans, 3 8 ( P t 1 ) : 1 1 6 - 3 1 .

Szűcs Diána 7015-ben csatlakozott ¿ laborhoz B.Sc szakdofgnxá hall- ga főként. 2015-ben megszerezte biológus diplomáját és az Ale'xandrúpofiban megrendezett SymBioSE konferencián eredményeit előadás és poszter formájában prezentálta. 2016-ban I . évfolyamos Biológia M.5c. hallgatóként részt vett a Tudományos Diákköri Konferencia tavaszi fordulóján, melyen a

„A DNS hibajavítást segítő hiszton poszt-transzlációs módosítások in vivo vizsgálatára alkalmas kísérleti rendszer létrehozása Drosophila és humán modellrendszerben " című pályamunkájával Hl. helyezést ért el. 2016 nyarán az MBKE 2016. évi Vándorgyűlésén a labor által létrehozott kísérleti elren­

dezési poszter formájában mutatta be. Jelenleg M.Sc. hallgatóként dolgozik a laborban, kutalási tevékenysége a kettős-szálú DNS törések hibajavításában résztvevő hiszlon poszt-transzlációs módosítások azonosítására irányul.

P a n k o t a i T i b o r 1999-ben csatlakozott a Dr. Boros Imre által vezetett Fukart'ófá Transzkripció Szabályozás Kutatócsoporthoz. Kutatási témája a Drosophila mcianogaster hiszton ecctüfranszferáz komplexc-k jellemzése volt.

A biológus diplomát 20O3-ban, majd a kutatási témáját folytatva a Ph.D.

fokozatot 2007-ben szerezte meg. Posztdoktor kutatóként 4 hónapot töltött Alexander Pintzas athéni laboratóriumában, majd 2009-ben csatlakozott Evanthia Soutoglou akkor induló kutatócsoportjához (IGBMC, Strasbourg, Franciaország). A strasbourg! posztdoktori időszak alatt elnyerte az FRM és a La Ligue kutatási ösztöndíjakat Hazatérése után 2015-ben megalapította a Genom Integritás és DNS Hibajavítás Kutatócsoportot. 2014-ben elnyerte az MTA Bolyai ösztöndíjat, míg 2016-ban a Magyar Genetikusak Egyesülete Gyűrffy Barna díjjal jutalmazta.

BIOKÉMIA

X L . i v f u i y u m 4. mám 2 0 i 6. d e c e m b e r 2?