Neurotoxikus β-amiloid oligomereket felismerő foldamer hélixek

Neurotoxikus β-amiloid oligomereket felismerő

foldamer hélixek

Bartus Éva IV. évfolyam,

Gyógyszerkémiai Intézet

2012.04.19. 2

lg MW

-Fehérje felszínének felismerése és gátlása - Enzim rezisztens - Optimális szintézis

150 kD 3 kD

5 kD

NH N

H

O R³ O

R²

Bevezetés

N O

O

Aβ(1-42)

Alzheimer-kór

Foldamer

AChE inhibitorok Bapineuzumab

Neuropeptid Y analóg

Angew Chem Int Ed 2003, 42, 202

CGRP analóg integrin ligandum

J Med Chem, 2006, 49, 616

Szomatosztatin sst

receptor

agonista

Angew Chem Int Edit, 1999, 38, 1223

HIV gp41 membrán

fehérje

J Am Chem Soc, 2005,127, 13126

BH3- Bcl-x

Interakció gátlás

Angew Chem Int Edit,

2009, 48, 4318

2012.04.19. 4

A(1-42)

A-oligomerek

Toxikus formák

Amiloid plakkok

Glu- Ala- Phe- Phe- Val- Leu- Lys

B

NMR szűrés K

(A)= µM - mM

K

(B)= µM - mM

H₂N COOH

COOH R

H₂N

H₂N COOH R

A

Tervezés

6

Szekvenciák

Arg

Asp Arg

Asp Arg

Asp Lys

Asp Arg

Glu Ser

Ser

2012.04.19.

1

2

3

5

6

7

4

Szintézis

2012.04.19. 8

H₂N NH O

N

NH₂

NH₂

NH

O

NH O

NH O

OH O

O HN

NH₂ O

Aszpartimid képződés

7

2012.04.19. 10 HN

X O

O NH

N NH

O

O

HN OH O

O NH

OH NH O

O NH

+

Hidr.

• Kézi szintézis

• Hidroxibenzotriazol

• Metil- észter képzés

Tisztítás

H₂N NH

O

N

NH₂

NH₂ NH

O

NH O

NH O

COOH

NH O

NH₂ O

7

NYERS

TISZTÍTOTT

2012.04.19. 12

Foldamer Foldamer+ Aβ

1

2

3

+

-

+

-

Kötődés

H₂N H

N N

H

HN N

H NH₂

C O

C O

C O

C O

C O

Gly

NH NH NH NH NH NH₂

O

O

O

O

O H₂N

O

COOH

N

NH₂

NH₂

H₂N NH NH NH NH NH NH₂

N

NH₂

NH₂

COOH O

O

O

O

O

O

H₂N NH NH NH NH NH NH₂

O

O

O

O

O

O COOH

H₂N N

NH₂

5

6

7

Foldamer Foldamer+ Aβ Kötődés

+

+

+

+/-

H₂N NH NH NH NH NH NH₂

O

O

O

O

O

O COOH

NH₂

H₂N NH NH NH NH NH NH₂

O

O

O

O

O

O

N

NH₂

NH₂

COOH

H₂N NH O

N

NH₂

NH₂ NH

O

NH O

NH O

COOH

NH O

NH₂ O

H₂N NH O

NH NH

O

NH NH

O

NH₂ OH

Amfi

2012.04.19. 14

Asp

Arg

Szerkezet

ELISA

0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0

0,001 0,01 0,1 1 10 100 1000

Normalizált abszorbancia

Aβ koncentráció (μM)

Arg Asp

A A A A

HRP HRP HRP HRP

+H

O

Streptavidin Biotinilált foldamer Amiloid + elsődleges antitest

HRP-al konjugált másodlagos

antitest

Összefoglalás

2012.04.19. 16

H-[1S,2S]-ACHC-β

hArg-[1S,2S]-ACHC-[1S,2S]-ACHC-β

hAsp-[1S,2S]-ACHC-NH

Arg Asp

Változtatására a kötődés megszűnt

Előzetes szerkezet- affinitás vizsgálatok alapján: szekvencia függő

H-[1S,2S]-ACHC-β

hSer-[1S,2S]-ACHC-[1S,2S]-ACHC-β

hSer-[1S,2S]-ACHC-NH

Nincs tr-NOESY-ban mérhető kötődés

Kötődés affinitásának és specificitásának növelése  LIGÁLÁSSAL

Saját munkám

1. H-[1S,2S]-ACHC-β³hArg-[1S,2S]-ACHC-[1S,2S]-ACHC-β³hAsp-[1S,2S]-ACHC-NH₂ 2. H-[1S,2S]-ACHC-β³hArg-[1S,2S]-ACHC-β³hAsp-[1S,2S]-ACHC-[1S,2S]-ACHC-NH₂ 3. H-[1S,2S]-ACHC-[1S,2S]-ACHC-β³hArg-[1S,2S]-ACHC-β³hAsp-[1S,2S]-ACHC-NH₂ 4. H-[1S,2S]-ACHC-β³hArg-[1S,2S]-ACHC-[1S,2S]-ACHC-[1S,2S]-ACHC-[1S,2S]-ACHC-

[1S,2S]-ACHC-β³hAsp-[1S,2S]-ACHC-NH₂

5. H-[1S,2S]-ACHC-β³hLys-[1S,2S]-ACHC-[1S,2S]-ACHC-β³hAsp-[1S,2S]-ACHC-NH₂ 6. H-[1S,2S]-ACHC-β³hArg-[1S,2S]-ACHC-[1S,2S] ACHC-β³hGlu-[1S,2S]-ACHC-NH₂ 7. H-[1S,2S]-ACHC-Arg-[1S,2S]-ACHC-[1S,2S]-ACHC-Asp-[1S,2S]-ACHC-NH₂

Szintézis:

- Kézi: 1 2 4 7

- Mikrohullámú: 6 7

Analitika és tisztítás:1 3 5 6 7

2012.04.19. 17

TÁMOP-4.2.2/B-10/1-2010-0012 projekt

Köszönetnyilvánítás

• Dr. Martinek Tamás

• Olajos Gábor

• Dr. Mándity István

• Wéber Edit: ^NMR

• Dr. Hetényi Anasztázia: ^NMR

• Dr. Fülöp Lívia : ELISA, Amiloid oligomer preparátum

• Dr. Bozsó Zsolt: Amiloid oligomer preparátum

Köszönöm a figyelmet!